推 sGoat:有denature的步驟...NaOH... 04/19 17:51
推 goodman1:嗯嗯，瞭囉，謝謝 ^^ 04/19 18:30
→ sGoat:或是加熱都可以... 04/19 19:22
推 goodman1:沒做過真的就只能用想像的 XD 謝謝 :) 04/19 20:06
※ 引述《goodman1 (帥哥皮 好人骨)》之銘言：
: 嗯嗯，想問個Southern blot的問題 ^^"
: 就是在paper上他是要看同一個基因的甲基化情形
: 他先用甲基化敏感的酵素SmaI去切genomic DNA
: overnight後再用PstI再切一次再overnight
: 然後用agarose gel跑電泳再transfer到Hybond N+ membrane
: 用random primed method用[阿法三十二P ]dCTP-labelled fragment去黏
: 再用一些我看不懂的鬼overnight以後用機器去看band
: 重點來了
: 他說Probes were made by PCR. 然後附了幾組primer
: 嗯嗯嗯
: 我的問題是
: 「Southern blot的probe是用PCR作的喔？」＠＠？
: 我以為Southern blot要作PCR是因為一開始的DNA量不夠耶 Orz
: 以上，謝謝大家 QQ
嗯嗯，謝謝証鴻跟小羚羊
不過我還是搞不是很懂Southern的原理＠＠
他是先跑PCR跑出PROBE（雙股？）
然後限制酉每切一切後再跑電泳，transfer，用probe去抓
可是probe是雙股的，限制酉每切了以後應該還是雙股的吧
兩個雙股的怎麼去抓？＠＠？
還是中間有什麼denature的動作是PAPER沒寫的嗎？＠＠？
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┌ 暗戀---->時間久---->痛苦---->結束
朋友----->喜歡─┤ ┌ 失敗---->避不見面---->痛苦---->結束
(常在一起) └ 表白 ┤ ┌ 戀愛-->日久無趣-->痛苦-->結束
(掙扎) └ 成功 ┼ 戀愛-->移情別戀-->痛苦-->結束
└ 戀愛-->結婚-->無法結束---┐
無盡的痛苦
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