推 Jiangnanstyl:我忘記講說我是用40%Etoh稀釋的 10/10 23:34
※ 引述《hunter2525 (Just for you!!!)》之銘言：
: ※ 引述《Jiangnanstyl (Jiangnan)》之銘言：
: : 連續稀釋法
: : 假設protocol這樣寫
: : 6.01 stock 取100ul
: : 在加900ul EtOH
: : =601mM
: : 再來取601mM 100ul
: : 在加900ul EtOH
: : =60.1mM
: : 再來取60.1mM 10ul
: : 在加990ul
: : =601uM
: 這裡一次稀釋100倍?!
: 為何不照之前的10倍稀釋下來?
: 稀釋倍數過大需等一段時間達平衡
: 否則這時取的濃度不會剛好是你所要的
: 可以vorteX久一點或以滴管mix
因為定量吸管總有一定量的體積誤差，一次稀釋100倍的誤差會很明顯
因此10倍稀釋下來應該是比較保險的
可以用水與天秤對pipette作簡單的校正
: : 再來取601uM 20ul
: : 在加 581 ul EtOH
: : =20uM
: : 再來取20uM 200ul
: : 跟200ul EtOH
: : =10uM
: : 再來取10uM 200ul
: : 跟200ul EtOH
: : =5uM
: : 以上分別裝到6個eppendort
: : 請問各位這要怎麼稀釋壓 最近做出來濃度不是太多就是太少 或者R平方沒0.99
: : 以第一步驟來說 我是先用P1000取900ul EtOH
: : 在用P200加100ul stock 裝到同個eppendort
: : 之後vorteX 兩秒後
: : 再把p1000那隻tip 排掉再裝新的tip 取900ul EtOH
: : 再用p200取剛剛vortex2秒完100ul 的 601mM濃度
: : 裝到第二個eppendorf
: : 可是學長說這樣太麻煩了 叫我先把酒精一口氣加完 (把六個eppendorf所需要的)
: : 在慢慢加stock
: : 可是我照他那用做後就沒0.99了
: : 請問各位再做連續稀釋法時都怎麼做~"~
: 若沒一次加完EtOH會有0.99嗎?(濃度是5uM→601uM ?)
: 範圍可能太大
: 建議:(1) 5uM→100uM or 30→601uM
: (2) 以syringe取EtOH & standard
: (3) 高手請補充...
我猜是酒精會揮發，一次load完如果速度不夠快
酒精的體積很有可能會變，猜測原po學長手速應該不低
建議還是按protocol做
另外，檢量線的濃度等級差了近5個order
我不是原po的領域，但一般來說要拉超過5個order的檢量線
要注意一下線性範圍(看原po配方像是一個濃度order一個點)
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