推 peik35:講解得好詳細!謝謝你的幫忙 06/05 18:01
推 mulkcs:推 XD 06/08 02:23
※ 引述《peik35 (P)》之銘言：
: 因為Paper關係,念到perforated-patch技術
: 本身不是走電生理相關,所以對一些專有名詞查過之後,仍不太清楚
: 所以上來請教各位
: 源由:
: 這篇paper在這部分主要是探討,對於一個鈣離子通道,使用perforated-patch技術
: 來分辨此通道為 inwardly-rectifying 或是 outwardly-rectifying
: 我想問的是:
: 1. perforated patch指的是什麼? 跟 whole cell差異是?
perforated patch是一種實驗難度較高的紀錄方法, 能避免實驗配製的細胞內液影響真正
細胞質組成, 比如細胞內氯離子濃度或是特殊胜肽蛋白(polyamine or G-protein).
實驗方法是在記錄用的玻璃電極內loading能將細胞膜打洞的antibiotics, 比如
amphotericin B or Gramicidin, 而只有後者能打出只通透單價陽離子的通道.
相對地, whole cell recording就是完全打通細胞膜, 其配製的internal solution應會
取代原本的細胞內液.
由於perforated patch要在膜上打洞, antibiotics的濃度和internal solution組成都會
影響實驗進行所需的時間和成功機率, 一般而言要打到Rs<100 MOhm signal才會夠好,
時間大約是半小時, 如果internal solution的condition沒抓好, 可能打一個小時都沒動
靜, 或是可能打十分鐘就破了, 因此實驗難度頗高
: 2. inwardly-rectifying 或是 outwardly-rectifying各表示什麼?
inward currents: 就是指實驗紀錄到的向下電流(在Y軸上為負值), 代表細胞depolarized
了, 放大器為了要控制細胞在特定電位(voltage-clamp), 因而透過電極注入細胞的負電
流
相反地, 也有 outward currents
所以inward 和 outward 指的是方向, 而rectifying則是在形容電流的非線性變化
當細胞膜被控制在不同電位時, 比如-70~+70 mV, 紀錄特定離子通道打開所產生的電流,
分析電位與電流的變化時, 如果在Y<0的部分, 電流呈現非線性變化, 而Y>0呈現線性變化
, 稱作inwardly-rectifying 或是 inward rectification, 反之則是 outward
rectification
: 3. 另外這張圖是paper上的Data,http://ppt.cc/hIKy 紅線是指加入ligand前,
: 黑線是表示加入ligand後,鈣離子通道的情形,而這要如何解釋此通道為inwardly
: 或是 outwardly-rectifying ?
根據上面的說明便能解釋為inward rectification
: 不好意思,因為對於問題本身的了解,可能給的資訊還不夠,請各位見諒!
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