http://72.14.235.104/search?q=cache:Zg-BzJfJJ00J:www.zz7zz8.com/articles/yyhyzcfg/Articles~ID~3175.htm+%E4%B9%B3%E9%85%B8%E8%8F%8C+%E7%A8%80%E9%87%8B+%E5%80%8D%E6%95%B8&hl=zh-TW&ct=clnk&cd=26&gl=tw
本試驗法包括牛奶凝固力、乳酸鑒別法、活乳酸菌數測定法及鑒別法。
一、牛奶凝固力及乳酸鑒別法1.牛奶培養基的制備取脫脂奶粉,製成1015％的溶液分
裝於試管中,每管20ml,用115℃蒸汽滅菌20分鐘。
2.試驗法
(1)牛奶凝固力 取供試品0.1～0.3g，加至牛奶培養基20ml中，搖勻,在37℃培養48
小時(必要時可延長至72小時)，同時作兩管，作為供試品管，以牛奶培養基為對照管，供
試品管的牛奶應呈正常凝固現象（表面無多量乳清分出，凝塊均勻稠密結實，無氣體產生
，無消化現象）。
(2)乳酸鑒別 取上述供試品管和對照管的培養液各1ml，分別注入兩支試管 (15×
160mm)中，各加10％硫酸溶液3～5滴，振搖，加乙醚約10ml，猛烈振搖，放置數分鐘，分
別將上層乙醚液倒入兩支試管(16×180mm)中，於熱水浴中,除去乙醚。
殘留物中各加水2ml，搖勻，分別吸取0.2ml置另兩支試管中，各加硫酸2ml，搖勻，
置水浴中加熱2分鐘，取出，立刻用冷水冷卻，分別滴加10％愈創木酚的乙醇溶液1滴，振
搖後,對照管顯橙色。
供試品管應顯紅色。
3.結果的判斷
(1)乳酸鑒別試驗呈正反應，牛奶呈正常凝固現象，供試品優良。
(2)乳酸鑒別試驗呈正反應，牛奶呈不均勻的凝塊，並分出大量乳清,凝塊有汽泡及消
化現象，表示有雜菌生長，供試品符合規定。
(3)乳酸鑒別試驗呈負反應，牛奶呈不正常凝固或者不凝固，供試品不合格規定。
二、活乳酸菌數測定法1.培養基的制備
(1)含糖牛肉湯培養基牛肉浸液(或0.3％牛肉浸膏 1000ml氯化鈉 5g?
10g乳糖 20g取氯化鈉、?、乳糖加入牛肉浸液中，置水浴上加溫，攪拌，使完
全溶解，放冷至室溫，調節pH值使滅菌後為6.0，115℃滅菌20分鐘。
(2)含糖牛肉湯瓊脂培養基 照含糖牛肉湯培養基處方的基礎上,加溴甲酚紫0.06g,再
加瓊脂使每1000ml中含瓊脂15～20g，在水浴上加熱使溶解，分裝後，115℃滅菌20分鐘。
(3)20％碳酸鈣混懸液 取極細結晶性的碳酸鈣粉末,加水製成20％的混懸液,121℃滅
菌20分鐘。
2.測定法
(1)供試品稀釋液的制備 按無菌操作法，從兩個包裝供試品中，按各品種項下規定的
取樣量取樣，加入盛有適量滅菌生理鹽水和玻璃珠的錐形瓶中，振搖均勻，製成1:10的混
懸液，用1ml的滅菌吸管稀釋製成1:10<2>、1:10<3>、1:10<4>、1:10<5>與1:10<6>等各種
稀釋度的混懸液，每一稀釋度吹洗三次，並更換吸管。
(2)接種與培養 用滅菌吸管吸取每種稀釋度的混懸液1ml，吹入滅菌平皿中，每份接
種二個平皿。
將20％碳酸鈣混懸液置水浴中加溫後，搖勻,趁熱用滅菌吸管吸取5ml加至已溶化的含
糖牛肉湯瓊脂培養基100ml中,搖勻，放冷至45～55℃，取10～15ml加至上述已接種供試品
稀釋液的平皿中，隨即轉動平皿，使充分混合均勻，待瓊脂凝固後，翻轉平板，在37℃培
養72小時後，觀察結果。
有透明圈的菌落為乳酸菌。
(3)菌落計算 選取菌落分佈均勻、菌落數為30～300個的平皿，計數菌落數。
求得兩個平皿的平均菌落數(若兩個平皿的菌落數相差一倍以上，需重新試驗)，再乘
以供試品的稀釋倍數，即為每1g乳酸菌制劑所含的活菌數。
三、乳酸菌鑒別法1.運動性檢查
(1)培養基 用活乳酸菌數測定法項下含糖牛肉湯培養基。
(2)鑒別法 自活乳酸菌計數的平皿中，選出具有透明圈的各種不同形態的菌落,每種
選取兩個菌落，分別接種至含糖牛肉湯培養基中，在37℃培養24小時後，應生長發育良好
。
取菌液，以懸滴檢查法觀察，應無運動性。
2.石蕊牛奶凝固試驗
(1)石蕊牛奶培養基的制備 取牛奶培養基，每100ml中加入石蕊乙醇溶液2.5ml，混
勻，取5～10ml分裝於試管中，115℃滅菌20分鐘。
(2)試驗法 自上項含糖牛肉湯培養液中，取一白金耳菌液，種入5～10ml的石蕊牛奶
培養基中，在37℃培養48小時，石蕊應還原為無色，牛奶應呈正常凝固現象，培養基上層
表面應呈紫紅色環。
3.顯微鏡檢查自上項含糖牛肉湯培養液中取菌液塗片，革蘭氏染色後，於油鏡下檢查
，記錄其形態和革蘭氏染色的顏色。
4.酸度測定及乳酸鑒別試驗自上項含糖牛肉湯培養液中取一白金耳菌液，種入牛奶培
養基20ml中，另取對照用牛奶培養基20ml，同時在37℃培養48小時後，分別進行酸度測定
及乳酸鑒別試驗。
酸度測定法
取培養後的牛奶培養基5ml，置100ml的錐形瓶中，加水20ml和酚?指示液3滴，用氫氧
化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定至淡紅色，並在1分鐘內不褪色。
5.接觸?試驗自上項含糖牛肉湯培養液中取一白金耳菌液，種於含糖牛肉湯瓊脂斜面
上，在37℃培養48小時後，將3％過氧化氫溶液滴加於生長的菌落表面上,觀察有無汽泡產
生，有汽泡則為陽性反應，反之則為陰性反應。
注牛肉浸液 取新鮮牛肉，除去肌腱和脂肪，切細，絞碎後，每1000g加水3000ml,充
分攪勻，在2～10℃浸泡20～24小時後，煮沸1小時，濾過，壓乾肉渣，補足液量,分裝
,121℃滅菌30分鐘，置冷暗處備用。
石蕊乙醇溶液 取石蕊20g，研磨後置錐形瓶中，加入40％乙醇150ml，煮沸1分鐘,傾
出上層液，再加入40％乙醇150ml，煮沸1分鐘，傾出上層液，與第一次傾出液合併，再加
40％乙醇至全量為300ml。
滴加1mol/L鹽酸溶液，隨加隨振搖,至溶液變紫色為止。
pH值應為6.0～6.8。
活乳酸菌計數 如在較小稀釋度的培養基中所生長的菌落數量較多,菌落形態相似,呈
極小點狀或梭狀；或在較大稀釋度的培養基中菌落形態相似時，可能為乳酸菌生長，照乳
酸菌鑒別法項下的懸滴檢查法或石蕊牛奶凝固試驗法鑒別，如為乳酸球菌，應不計算在內
。
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