抽DNA的方法
1. 取4.5ml菌液,離心9Kg,10分鐘。去除上清液。重覆約2次。
2. 沉澱以200μl STE buffer 振盪清洗約2次,離心9Kg,10分鐘。
3. 沉澱溶於400μl STE buffer。
4. 加入80μl之10% SDS,65℃ 水浴,30分鐘。
5. 加入5μl 之proteinase K ( 20 mg mL-1 ),37℃ 水浴,4小時。
6. 加入400μl STE buffer,搖動使均勻混合。
7. 加入等量之phenol搖動使均勻混合,離心12000rpm,5分鐘。同法依序以phenol,phenol/chloroform,chloroform萃取純化2-3次。(吸取上層液時要用大頭tip)
8. 加入10μl 之RNase A(1 mg mL-1),37℃ 水浴,1小時。
9. phenol/chloroform 萃取純化2-3次。
10. 加入總體積之1倍95% isopropanl (-20℃),搖動至均勻混合。(應可見DNA懸浮)
11. 離心15000g,10分鐘。
12. 以 75% 酒精rinse清洗DNA 2次。
13. 靜置至酒精揮發。
14. 將DNA溶於ddH2O。
STE buffer : 10mM Tris-HCl (pH 8.0),100mM NaCl
(可先配1M Tris-HCl,0.5M EDTA,5M NaCl再稀釋)
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生命的意義不在追求答案
答案只是另一個答案的問題
生命在於去體會與經歷
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