[討論] 請當做是BCT的小菜吧

[gg258 (油雞龍)]

說是這麼說，其實只是潛水太久(喂)
這是我在MIT開放式課程網上微生物遺傳學看到的~
參考一下吧
以後實驗說不定會說到重複的：那就當我沒PO吧(死)

核酸定量
DNA或RNA (根據260奈米吸光值)
1. 準備稀釋於蒸餾水的DNA或RNA樣本 (一般以1：100或5：500微升)
2. 使用紫外線光源， 測量波長260奈米之吸光值， 亦可測量波長280與230奈米之吸光值
 (260/280比值應約2/1； 260/230比值也應約2/1)
3. 欲計算原溶液之濃度：
A260 x 轉換因子 x 稀釋因子 = 原溶液DNA濃度 (μg/ml) 每吸光單位
轉換因子： 對雙股DNA而言是50μg/ml； 對單股DNA或RNA是40μg/ml
一個鹼基的平均分子量為326.95 。 因此， 一個鹼基對的平均分子量為753.9 。 欲由此
值計算出結果的微莫爾數， 可以下述方式計算：
(2 × μgDNA) ÷ [753.9 × (雙股DNA的鹼基長度)]
因此 1μg的pUC DNA相當於(2 × 1μg) ÷ [753.9 μg/μmol 鹼基x 2676 鹼基]
或2 μg ÷ 2017436.4 9 μg/μmole = 1x10-6 μmol

Oligodeoxynucleotides
1. 計算Oligodeoxynucleotides的消失係數：
a. 將各個鹼基-A、T、G、C 的出現數目列表
b. 將結果乘以下列的值：
A的數目 x 15.4ml/μmole
C的數目 x 7.3ml/μmole
G的數目 x 11.7ml/μmole
T的數目 x 8.8ml/μmole
c. 這些結果的總合即為消失係數，e
2. 測量Oligonucleotide溶液於波長260奈米之吸光值
3. 以下列公式計算濃度：
濃度 = A260 / e (註 ： μmole/ml = mM)
NB. Oligonucleotides常以冷凍乾燥粉末附上多少吸光單位供應； 一個吸光單位大約相
當於將樣本溶於1ml 的A260值； 這個資料可用上述之公式估計出於水溶液中oligo的濃度
， 由這個資料， 可以配製出較合宜的濃度。 例如：
一個oligo的?值為262.9ml/μmole； 3 OD單位； 因此 1 ml溶液的濃度為 3/262.9 ml/
μmole = 11.4 μM， 若想配成20 μM則由C1V1 = C2V2：
1 ml x11.4 μM = ? x 20 μM；
(1 ml x11.4 μM)/ 20 μM=0.570ml
所以應溶於570微升


就是這樣。
有人要「問」一下沙茶醬嗎？(啥)

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推 asukaakimoto:推~