複習

[oceanice ( 情誡.)]

分生簡答題


*請回答下列有關以alkaline lysis method 分離細菌質體DNA的問題

1.請說明此方法如何去除染色體DNA而保留質體DNA

        先將細胞懸浮在等張溶液中, 再以含SDS的鹼性溶液處理,
        使染色體DNA變性, 但plasmid DNA為supercoil結構, 在
        pH12.0-12.5範圍內不會變性.
        再加入酸性溶液中和, 變性的染色體DNA會相互配對成團狀
        而質體DNA會留在上清液中.

2.說明slon123的作用

        soln1 為細胞的等張溶液, 使細胞懸浮
        soln2-NaOH 破壞氫鍵, 使染色體變性.
              SDS 將細胞膜打破
        slon3 酸性溶液, 使染色體DNA相互配對後沉澱

*請回答下列有關DNA電泳的問題

3.一般DNA電泳所用的洋菜膠體, 其agarose的濃度約為0.8-1.0%. 若agarose
  的濃度增加, 對膠體中的孔動大小有何影響.
  今欲分離數個極小的片段, 則agarose的濃度應該增加或減少.

        濃度越大孔洞越小
        增加

4.在進行DNA電泳時, 要將DNA solution loading 至洋菜膠體中的well 中
  在loading前, 為何需先與loading buffer混何.
  loadinf buffer 中含有什麼物質, 其作用為何.

        我怎麼知道為什麼要先跟loading buffer 混合
        loading buffer中含有tracking dye, giycerol, TAE/TBE buffer.
        tracking dye 可方便我們看出電泳進行的程度
        glycerol 可使DNA沉入well底部

5.在DNA電泳中, 使用EtBr的目的為何.
  為什麼使用EtBr時應帶手套.

        EtBr可崁入DNA中
        EtBr為強致癌劑

*請回答下列有關限制酵素與限制圖譜的問題

6.限制酵素的單位為何.
  如何定義.

        unit.
        一unit意即在反應總體積為20ul, 最適溫度等條件下, 可以一小時的
        時間將1ug DNA分解完全的限制酵素量.

7.請問在E. coli的genomic DNA(共約48000kb)中, 可能會有多少個Sau3A 1,
  EcoR1, Not 1的切割位.
    ˙48000kb=4800000個鹼基對
    ˙Sau3A 1:辨識4個核酸
      EcoR 1:辨識6個核酸
      Not 1:辨識8個核酸

        我不會

8.略


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        我們是冰, 
         沒有洄游溫暖海洋的命運.    

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.csie.ntu.edu.tw) 
◆ From: 210.85.47.213
→ sco:第一題的答案怪怪的  :p
→ oceanice:/.\怎麼辦