[情報] genomic DNA 的步驟

[hwafun (偶要出企玩拉@@~)]

細菌 Genomic DNA 快速抽取法
此方法可快速、經濟的抽取細菌chromosome DNA，且其所抽取的DNA 品質很好，限制脢可
很完全的切割此方法所抽取的DNA。
儀器：
桌上型離心機
低溫離心機
緩衝溶液：
Lysis buffer
Tris-acetate pH 7.8 40 mM
Sodium-acetate 20 mM
EDTA 1 mM
SDS 1 %
phenol/chloroform Phenol (Tris-Cl pH 8.0緩衝液飽和) 25 ml
Chloroform 24 ml
Isoamyl alcohol 1 ml
3 M sodium acetate
Sodium acetate.3H2O 40.8 g，加水 80 ml，以glacial acetic acid調pH (7.0， 6.0或5
.2)，加水至100 ml，高溫高壓滅菌，保存於室溫。
TE buffer
Tris-Cl 10 mM
EDTA 1 mM
用HCl調pH為7.4或8.0儲存於室溫備用。
RNase A stock
將粉末狀的RNase A溶於TE buffer至濃度10 mg/ml，加熱煮沸5分鐘，自然冷卻後分裝儲存
於 -20℃備用。
實驗步驟：
1.取1.5 ml菌液於微量離心管，離心 (12,000 rpm, 3 min)，去除上清液。
2.於菌體內加入200 ul 的lysis buffer 混勻，加入66 ul 5M的NaCl混勻後離心 (12,000
rpm, 10 min)。
3.取上清液於新的離心管，加入等體積的phenol，溫和的混勻後離心 (12,000 rpm, 3 min
)。
4.取上清液於新的微量離心管，加入等體積的phenol/chloroform溫和混勻，離心 (4℃, 1
2,000 rpm, 3 min)。
5.吸取上清液於新的微量離心管。重複加入phenol/chloroform溫和混淆，離心，取上清液
的步驟，直到離心後水層與有機層的界面無白色蛋白沉澱為止。
6.於上清液中加入RNase A 至最終濃度為50 ug/ml，置於37℃中30分鐘，以去除RNA。
7.加入phenol/chloroform溫和混勻，離心，取上清液。
8.加入1/10體積的3 M sodium acetate及等體積的isopropanol混勻，置於冰上10分鐘，離
心 (4℃, 12,000 rpm, 15 min)，去除上清液，白色沉澱物加入70%酒精1 ml漂洗，然後離
心(12,000 rpm, 1 min) 去除上層酒精，將白色沉澱物真空抽乾。如欲馬上使用可溶於去
離子水，如欲長期保存可溶於TE buffer。
重要提示：
加phenol/chloroform 混勻及抽取上清液時請溫和操作，以免弄斷DNA。



大家就參考一下
這是我今天在家裡閒閒去找的東西
= =  其實是要聽英文拉  不過太懶了....
大家加油拉  這禮拜好像不用交唷

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時間過的很快  一點一滴在消逝
      隨著時間過去，越漸模糊無法確認的味道

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推 beautysmile:最後一句話最吸引人...^^||
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