[情報] Agarose gel electrophoresis

[hwafun (偶要出企玩拉@@~)]

Agarose Gel電泳
試劑耗材：
A.材料： 1. 將0.7-1%藻膠糖溶於溶液TBE或TAE中 2.1X TBE或TAE緩衝液(與上需相同) 3.
gel loading dye 4.10 mg/ml ethidium bromide
緩衝溶液：
a.50x TAE：
  242 g Tris base
  57.1 g glacial acetic acid
  100 ml 0.5 M EDTA

b.10x TBE
  108 g Tris base
  55 g boric acid
  40 ml 0.5 M EDTA, pH=8
  distilled water to 1 liter
  6x gel loading buffer
  0.25% Bromophenol blue
  0.25%Xylene cyanol FF
  15% Ficoll Type 4000
  120 mM EDTA
實驗步驟：
1. 先配置100 ml 0.7%藻膠糖溶液，於玻璃量杯或錐形瓶中量稱 0.7g藻膠糖和100 ml 1X
TBE或TAE緩衝液。 2.利用微波或於加熱板(hot plate)上用攪拌子加熱，直到溶液變成透
明為止。 3.冷卻至55oC(Ethidium bromide可在此時加入，濃度為0.5 μg/ml)。 4.準備製
膠的容器或盤子，現在都已有商品化現成的套件可用。 5.選擇適當的牙齒(tooth)並將其固
定於製膠盤中(牙齒的作用為在膠上產生適當大小的孔洞，用來loading樣本的)。 6.約倒入5
0ml 藻膠糖溶液置盤子中，牙齒插入的深度為5 mm。置於在室溫中約20分鐘等膠凝固。 7.
拔掉牙齒，準備開始跑電泳，小心地將已凝固的膠移至電泳槽，倒入電泳用緩衝液(與製膠
用的需相同)，並使牙齒製造出的孔洞均充滿電泳液。 8.多餘的藻膠可以儲存於室溫或是
重新力庸微波爐溶掉。 9.樣本的配置以每 5 μl DNA加入1 μl 的 6x gel loading dye，
均勻混和後，每個孔洞加入5-12 μ DNA。 10.電泳電壓約從50-150伏特間，跑膠的時間依DN
A的片段大小為準。 11.假如在配膠時沒有加入 ethidium bromidestain，此時可利用 0.5
 μg/ml ethidium bromide染。之後可以在短波UV光下顯現出螢光，如果DNA是要用來clon
ed可用手持式長波UV光來觀察


這些阿   請實驗完後 板主d一下  要不然有著作權問題= =～

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時間過的很快  一點一滴在消逝
      隨著時間過去，越漸模糊無法確認的味道

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 210.68.233.181
推 only500NT:謝囉...XD
推 Circumstance:著作權...(汗)
推 yishya:華芳真是個認真努力ㄉ好小孩....