[週記] 好久好久沒發的週記XDD

[kino0095 (Mr.北極熊)]

好久沒發，開學也一段時間了，來打一下我負責的實驗好了

我們實驗室是做HCV的(C肝)

我主要看的部分是關於C肝蛋白跟細胞貼附相關蛋白的作用

雖然有人發過這樣的paper了

但是他們是利用Y2H的方式做大量掃描

而我是利用IP的方式證明

而IP跟Y2H的優缺點自己孤狗一下巴

所以開始要contruct 每個細胞貼附蛋白 的plasmid

所接上的vector後面會表現兩種tag(V5 and polyHis)

為啥要這樣的原因

則是這樣可以不用買專門壓特定蛋白的抗體(抗體很貴滴)

可以直接利用壓V5 or His的抗體來達成你的觀測目的

而我建立的方式算是第二簡單的只要PCR出來在切RE後接上去就好了

最簡單應該是直接切不用P就可以接了

要P在切的話通常是在primer上有設計切位要考慮有沒有in frame(這個以前有教過喔)

有些實驗室會利用taq的特性在P完後接到別的質體在切(ex pGEM 的TA vector)

這樣其實比較好，也有可能比較快

像我那樣做(P完純化產物後切RE)會面對的問題

就是你可能切完兩刀要接進去的時候發現你的insert的濃度很低= =

所以你就要在P一次在切一次

但是你如果先接到別的質體，你就只要養菌 在切就可以拿到足夠的量

之後做好之後

就要做Transfection (跟transformation是不一樣滴  別說你忘了XD)

通常可以直接利用liposome(kit)來做

但是它很貴就是了= =

所以我是用Calcium phosphate + BBS的方式

有人是用HIPS(不確定是不是這樣拼)不過學長試過效率很差就是了

有人有效率高的HIPS protocol 可以提供給我嗎XDD

之後就收細胞lysis 去跑SDS PAGE看你transfect進去protein的表現量

如果OK的話

就要做co transfection(就是同時送兩個or兩個以上的質體)

我的話就是其中一個細胞黏附蛋白 + 認為會有interaction的HCV Protein進去

不過就今天我去壓片子的結果

果然沒那麼好弄    ╮(╯_╰)╭

不過反正我的時間還長的哩

就慢慢try condition瞜


===========================以下是條列式閒聊和笨點=============================

1.
台北最一直在下雨

不過都是小雨

天氣也變冷了 我已經把冬天的棉被拿出來了說

不過好像不是全台都那樣

南部好像還是好天氣

而東部那天竟然下雨下到淹水

這是怎了= =

台灣還能住人嗎!!


2.
下禮拜有微免所的六校聯誼

不知道回不會看到宣榮和思碩啊XDD

雖然說我不打桌球跟籃球

而且比賽是同時開始的樣子

希望可以看到老同學啊ㄎㄎ



3.
剛剛要去洗澡的時候

想說要帶本死亡筆記本進去看

結果......
   結果......
      結果......


他被我失手丟到馬桶裡了啊啊啊啊啊

今天才在笨版看到類似的人做這種事

就發生在我身上了啦  T______T

雖然說裡面沒有屎尿

但還是覺得很噁心啊   T _____ T


================以上是最近的流水帳，下次發文時間待商確XDDDD====================



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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 124.8.106.248
推 cobbco:你做的實驗跟我好像～只是我們都散錢直接用lipofectamine
→ cobbco:最近要買一台高級機器～就是不用壓片直接加ECL用照相的
→ cobbco:雖然狗他們早就有了！他們實驗是有很多你意想不到的儀器
→ cobbco:會讓你實驗超順利也超快速！他們實驗室可幸福了~
→ kino0095:那台我們有 不過我們不會用XDD 聽說要百萬起跳喔
推 cobbco:現在出一台很便宜的~50萬！聽說超多實驗室有興趣的~
推 cafe03569:好說好說...我們boss是闊氣的有錢人阿～有那台就要用阿
→ cafe03569:!!超方便的～不要浪費了！
→ tsaulei:好多喔......不過死亡的死亡筆記本哈  哈
推 oirsjtgo:一整個很詳細的週記...難怪會輸~狗你們家應該擺不下那麼
→ oirsjtgo:多儀器吧~我們家可以借你擺~
推 seeblood:喔  今天做好多實驗   我直接跳下來看閒聊~~
→ seeblood:閒聊怎麼沒有提到蟹寶王之類的阿?  也沒提到要來台中....
推 jessy1016:樓上的是在提妳的男朋友章魚哥嗎?
推 FANTSY:恩~~樓樓上應該是在說章魚哥!
推 seeblood:喔  你們不要看錯重點後!!  蟹寶王才是重點啊~~
推 sr00rz:前半部：看班版長知識  後半部：阿洗個澡還帶漫畫是怎樣= =
→ sr00rz:那不是拉屎的時候才會做的嗎?