有沒有助理是因為cloning做不出來而辭職的???
clone的還是人家做得很成功的東西....
挑不出來也就算了 是連菌落都不長出來讓我挑
跟學長做了 2 次 他的sample
+ 佳欣 1 次 學長的sample但是是佳欣做一步我做一步
再+ 自己之前 2 次 自己的sample
---------------------
5 次 失敗 = 五次心靈創傷
做一次就三四天, 外加週末, 我已經白領一個月的薪水了.........
--
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◆ From: 140.112.130.191
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: Rockport (歡喜看未來) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Wed Nov 7 14:04:47 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: 有沒有助理是因為cloning做不出來而辭職的???
: clone的還是人家做得很成功的東西....
: 挑不出來也就算了 是連菌落都不長出來讓我挑
: 跟學長做了 2 次 他的sample
: + 佳欣 1 次 學長的sample但是是佳欣做一步我做一步
: 再+ 自己之前 2 次 自己的sample
: ---------------------
: 5 次 失敗 = 五次心靈創傷
: 做一次就三四天, 外加週末, 我已經白領一個月的薪水了.........
錢多事少離家近
很多人都求之不得ㄝ
好好呆著ㄅㄟ :P
--
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◆ From: 140.112.252.121
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: sjy (朝夢想邁進:)) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Wed Nov 7 15:08:47 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: 有沒有助理是因為cloning做不出來而辭職的???
: clone的還是人家做得很成功的東西....
: 挑不出來也就算了 是連菌落都不長出來讓我挑
: 跟學長做了 2 次 他的sample
: + 佳欣 1 次 學長的sample但是是佳欣做一步我做一步
: 再+ 自己之前 2 次 自己的sample
: ---------------------
: 5 次 失敗 = 五次心靈創傷
: 做一次就三四天, 外加週末, 我已經白領一個月的薪水了.........
別這樣咩！
有時可能是某一個小動作沒做好
下次做時請學長全程在旁邊盯著妳
一定可以發現做不出來的原因的
我上次跟對面實驗室學用kit(?)抽large
也是在最後幾個步驟沒做好
花了別人1500元耶！
別太擔心.....做實驗本來就會碰到瓶頸的.....
加油囉！
--
Tomorrow is always fresh
without a mistake in it!
--
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◆ From: 210.200.153.8
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: oops (懷念總區) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Wed Nov 7 15:58:36 2001
※ 引述《sjy (朝夢想邁進:))》之銘言：
: 別這樣咩！
: 有時可能是某一個小動作沒做好
: 下次做時請學長全程在旁邊盯著妳
: 一定可以發現做不出來的原因的
嗚嗚～
學長第二次就是一直盯著我看，只有塗plate的時候不在
佳欣更是盯得緊
最後他們也都講不出我到底哪裡出了問題....
不知道下次哪裡要改進就覺得好沒力........
心情不好，我還跑去AI的網站跟人工智慧Chatbot聊天，無聊至極 >.<
: 我上次跟對面實驗室學用kit(?)抽large
: 也是在最後幾個步驟沒做好
: 花了別人1500元耶！
: 別太擔心.....做實驗本來就會碰到瓶頸的.....
: 加油囉！
--
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◆ From: 140.112.130.191
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: Karyon (超無力卡不勇) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Wed Nov 7 17:52:13 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: 有沒有助理是因為cloning做不出來而辭職的???
: clone的還是人家做得很成功的東西....
: 挑不出來也就算了 是連菌落都不長出來讓我挑
: 跟學長做了 2 次 他的sample
: + 佳欣 1 次 學長的sample但是是佳欣做一步我做一步
: 再+ 自己之前 2 次 自己的sample
: ---------------------
: 5 次 失敗 = 五次心靈創傷
: 做一次就三四天, 外加週末, 我已經白領一個月的薪水了.........
你跟學長一起做的時候
學長都有做出來嗎？
--
猜猜我有多愛妳....
我愛妳... 從這裡到一直到月亮...
再---繞回來
--
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◆ From: 140.112.253.203
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: oops (懷念總區) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Wed Nov 7 23:32:39 2001
※ 引述《Karyon (超無力卡不勇)》之銘言：
: ※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: : 有沒有助理是因為cloning做不出來而辭職的???
: : clone的還是人家做得很成功的東西....
: : 挑不出來也就算了 是連菌落都不長出來讓我挑
: 你跟學長一起做的時候
: 學長都有做出來嗎？
學長沒有做只有看，他是之前用同樣的insert有clone出來
佳欣跟我同步做，但是她用她的insert，有做出來,外在condition都一樣
學長上次clone出來之後抽出plasmid，我用它amplify出很多很多
純化後以它為insert，ligation也有成功，量不少
「理論上」應該比佳欣的好clone出來
這樣算起來應該是transformation操作的問題？但是大家都盯著我做哩
嗚嗚～卡勇，看到你回的文章讓我懷念起以前聚在學會討論paper的情形...
最近超容易懷念東懷念西
尤其是明早要進度報告、壓力特別大的時候...
--
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◆ From: 210.85.26.119
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: Karyon (超無力卡不勇) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 00:32:19 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: ※ 引述《Karyon (超無力卡不勇)》之銘言：
: : 你跟學長一起做的時候
: : 學長都有做出來嗎？
: 學長沒有做只有看，他是之前用同樣的insert有clone出來
: 佳欣跟我同步做，但是她用她的insert，有做出來,外在condition都一樣
: 學長上次clone出來之後抽出plasmid，我用它amplify出很多很多
: 純化後以它為insert，ligation也有成功，量不少
how do you know your ligation was successed?
tell me the size of your insert and vector
: 「理論上」應該比佳欣的好clone出來
聽你的說法好像不是你抽plasmid的問題
那會不會是elution的問題？
你elute出來以後去定量大概多少？
我覺得很可能是你ligation沒有做好
建議你試試看不同的比例
不用一定要遵守3：1
或是去看看聖經裡面...
完全照他的步驟來一次
: 這樣算起來應該是transformation操作的問題？但是大家都盯著我做哩
嗯嗯..佳欣作的出來代表competent cell可能是沒問題的
可是我還是要問你
你的selection marker和佳欣的是一樣的嗎？
你是不是塗錯plate啦？
: 嗚嗚～卡勇，看到你回的文章讓我懷念起以前聚在學會討論paper的情形...
: 最近超容易懷念東懷念西
: 尤其是明早要進度報告、壓力特別大的時候...
試試看下面的作法
或許能幫你找出問題
這次做的時候做三組
1.你要做的construct
2.拿一個很容易轉的plasmid做做看transformation
3.不轉東西進去（用無菌水充當plasmid喔）
如果1.成功了那就很好啦
如果2.成功了代表你的transformation
如果3.成功了救代表你們實驗室有鬼了
（哈哈..代表可能competent cell background不乾淨）
ps.第三個你可以試試看塗在含有不同抗生素的plate
--
猜猜我有多愛妳....
我愛妳... 從這裡到一直到月亮...
再---繞回來
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◆ From: 140.112.253.203
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: kitee ( ) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 03:35:58 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: 嗚嗚～卡勇，看到你回的文章讓我懷念起以前聚在學會討論paper的情形...
我們哪時有過這種年代...
能不能告訴我那時我在哪ㄚ...
--
oops!
送你一個東西唷...
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◥ ▆▅▄▅▇▆▅▇ By yummi
ꄠ
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正所謂風吹草低見牛羊
好詩 好詩
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◆ From: 140.112.222.129
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: cin (上帝的禮物) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 09:43:26 2001
我之前也常常是elute沒有弄好
所以產量非常低
後來學姊要我elute分兩次
同學要我將elute buffer(水啦) 溫度加高
這樣會好一點
其他我是不知道啦
transformation會怎麼出問題我也不知道
我只知道 光transformation
我的protocal已經出現三種版本啦
雪姬妳就繼續努力吧
妳這份助理的工作
實在很令我羨慕ㄟ
錢又多 又只要做實驗
(哎呀~ 人比人氣死人)
加油加油
--
微風飄飄英風凜
戀戀風城龍捲風
～風城投手之女～
--
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◆ From: 140.112.125.84
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: sjj (帥帥的柳丁哥哥) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 18:12:01 2001
※ 引述《kitee ( )》之銘言：
: ※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: : 嗚嗚～卡勇，看到你回的文章讓我懷念起以前聚在學會討論paper的情形...
: 我們哪時有過這種年代...
: 能不能告訴我那時我在哪ㄚ...
我的對面
--
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◆ From: 140.129.59.142
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: Halo (深紅色狐狸) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 19:28:11 2001
※ 引述《sjj (帥帥的柳丁哥哥)》之銘言：
: ※ 引述《kitee ( )》之銘言：
: : 我們哪時有過這種年代...
: : 能不能告訴我那時我在哪ㄚ...
: 我的對面
打橋牌時的對家嗎??
--
Halo /`helo/
1. a golden circle representing light around the heads
of holy persons in religious paintings (宗教畫像上,
圍著聖人頭部之)光環
2. a bright circle of light,as around the sun or moon
in misty weather (日月之)暈輪;光圈
--
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◆ From: 210.85.22.202
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: oops (懷念總區) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 20:22:45 2001
呼呼～謝謝卡勇～
今天有長一些東東出來唷！
可是幾乎都是藍藍ㄉ～～～>.<
但是實驗做到後來已經很難分析了
操作不穩定吧
所以五次得到的結果綜合起來就不合理了.....
今天meeting我進度報告
老師也只能說分生一定討厭我！
＊我ligaton至少都有10：1唷（甚至有一次23：1）！奢侈吧！
--
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◆ From: 140.112.197.121
※ 編輯: oops 來自: 140.112.197.121 (11/08 20:25)
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: oops (懷念總區) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 20:34:12 2001
※ 引述《cin (上帝的禮物)》之銘言：
: 後來學姊要我elute分兩次
什麼叫做分兩次呢？
: 同學要我將elute buffer(水啦) 溫度加高
是說放在dialysis bag裡頭的嗎？
: 這樣會好一點
我覺得好好玩
每間實驗室的方法都不同，連自己實驗是裡頭的每個也都一套不同的方法
跟完這個跟另一個人就得重新聽命於一個人
不小心就要鬧口角了！
--
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◆ From: 140.112.197.121
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: Jue ( ) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Thu Nov 8 21:03:42 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: ※ 引述《Karyon (超無力卡不勇)》之銘言：
: : 你跟學長一起做的時候
: : 學長都有做出來嗎？
: 學長沒有做只有看，他是之前用同樣的insert有clone出來
: 佳欣跟我同步做，但是她用她的insert，有做出來,外在condition都一樣
: 學長上次clone出來之後抽出plasmid，我用它amplify出很多很多
: 純化後以它為insert，ligation也有成功，量不少
: 「理論上」應該比佳欣的好clone出來
: 這樣算起來應該是transformation操作的問題？但是大家都盯著我做哩
: 嗚嗚～卡勇，看到你回的文章讓我懷念起以前聚在學會討論paper的情形...
: 最近超容易懷念東懷念西
: 尤其是明早要進度報告、壓力特別大的時候...
they have this trouble shooting section at the kit manual's last pages
if you are using kits maybe you'll find ur problem there, which is, very
ulikely
i always write down my protocol on the lab notebook first,
so you can go back to check if there is something wrong with your
experimental procedures, and another thing is controls, positive and
negative...well, i guess sometimes even with all these precautions
our experiments can still go wrong :P
well, it's just a tool, and mastering mol bio techniques
do not necessary guarantee ones success in science...
take ur time i'd say...
--
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◆ From: 128.122.12.133
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: KKKids ( 等待奇蹟) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Fri Nov 9 21:32:53 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: ※ 引述《cin (上帝的禮物)》之銘言：
: : 後來學姊要我elute分兩次
: 什麼叫做分兩次呢？
: : 同學要我將elute buffer(水啦) 溫度加高
: 是說放在dialysis bag裡頭的嗎？
: : 這樣會好一點
: 我覺得好好玩
: 每間實驗室的方法都不同，連自己實驗是裡頭的每個也都一套不同的方法
: 跟完這個跟另一個人就得重新聽命於一個人
: 不小心就要鬧口角了！
所以可以學到更多啊
不過我學姊會教我偷懶的方法
我自己又會偷省一些步驟
這樣下去......
以後學弟妹一定會越來越輕鬆
--
君自故鄉來 應知故鄉事
來日綺窗前 寒梅著花未
--
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◆ From: 61.218.3.51
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: lomay (你喜歡不如我喜歡) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Sun Nov 11 22:51:25 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: 有沒有助理是因為cloning做不出來而辭職的???
: clone的還是人家做得很成功的東西....
: 挑不出來也就算了 是連菌落都不長出來讓我挑
: 跟學長做了 2 次 他的sample
: + 佳欣 1 次 學長的sample但是是佳欣做一步我做一步
: 再+ 自己之前 2 次 自己的sample
: ---------------------
: 5 次 失敗 = 五次心靈創傷
: 做一次就三四天, 外加週末, 我已經白領一個月的薪水了.........
老人來插花
學妹
我的cloning已經作十五次左右了
plate大概已經用掉上百個
也是幾乎都沒有長任何菌落 連挑的機會都沒有
目前仍在掙扎中
我實在擔心自己能否順利畢業
跟我比起來
是不是感覺 五次 其實還好呢...
共勉之...
--
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◆ From: 140.129.59.25
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: phyton (飛) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Mon Nov 12 00:29:33 2001
其實我有一個construct
作了半年才做出來.....
老師還叫我去行天宮拜拜....:P
學姊加油ㄅㄟ....
--
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◆ From: 61.216.125.32
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: cin (上帝的禮物) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Mon Nov 12 11:01:05 2001
※ 引述《oops (懷念總區)》之銘言：
: ※ 引述《cin (上帝的禮物)》之銘言：
: : 後來學姊要我elute分兩次
: 什麼叫做分兩次呢？
就是若一共elute buffer有40 就分兩次變成20 20
: : 同學要我將elute buffer(水啦) 溫度加高
: 是說放在dialysis bag裡頭的嗎？
ㄟ 我們不是用加熱包啦 不過意思就是說 提高溫度到40度左右
最後再溶DNA 溫度要到60度左右
這是我的作法啦 每個人真的都不一樣呀
--
～輕雨飄飄 霓虹彎彎
疊疊彩光 颺颺我心～
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◆ From: 140.112.125.84
> -------------------------------------------------------------------------- <
作者: guestestest (？？？) 看板: BOTANY_90
標題: Re: 鬱悶助理
時間: Tue Nov 13 19:22:45 2001
我以前也有一直做不出來的cloning
insert是PCR而來的
結果原因是因primer有錯
所以永遠都做不出來
所幸後來發現錯誤
才能作出來
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◆ From: 140.109.64.95