我如果要接的片段~
兩邊是不同的終端~
像是 ATCGAAAAAAAAAA
TAGCTTTTTT
要把他接在有amp的plasmid上~
再塗在有amp的plate上~~
如果有長~
理論上是不是都是接成功而且接對的呢~~
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標 題: Re: 再問有關ligation~~
發信站: 台大計中椰林風情站 (Thu Aug 10 10:11:55 2000)
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==> CEFCA.bbs@ptt.csie.ntu.edu.tw (啦啦啦) 提到:
> 我如果要接的片段~
> 兩邊是不同的終端~
> 像是 ATCGAAAAAAAAAA
> TAGCTTTTTT
> 要把他接在有amp的plasmid上~
> 再塗在有amp的plate上~~
> 如果有長~
> 理論上是不是都是接成功而且接對的呢~~
根據這些sequences來看，如果沒有其他後續處理的話，理論上是不會接在一起的 ....
兩條dsDNA 3'-protruding 都是 AAAA，是不會互補的......
如果塗在amp plate有長，不是污染就是mutant長出來，
不過你可以養養看，再抽出plasmid，用restriction enzmye切後看看是不是你要的....
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標 題: Re: 再問有關ligation~~
發信站: 台大醫學院◎楓城杏話◎ (Sat Aug 12 00:53:15 2000)
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※ 引述《CEFCA.bbs@ptt.csie.ntu.edu.tw (啦啦啦)》之銘言：
: 我如果要接的片段~
: 兩邊是不同的終端~
: 像是 ATCGAAAAAAAAAA
: TAGCTTTTTT
: 要把他接在有amp的plasmid上~
: 再塗在有amp的plate上~~
: 如果有長~
: 理論上是不是都是接成功而且接對的呢~~
如果你的plasmid(vacter)上的斷端是
NNNNNNNN
TTTTNNNNNNNN
就可以接上
不過塗在Amp plate上有長並不一定就是你要的colony
畢竟如果plasmid的處理不夠好
self ligation的機會蠻大的
那你就會挑到一堆空包彈