實驗中要用兩個限制酵素切vector，然後以agarose電泳回收。
可是加入insert去做ligation
卻常會篩到原來的vector plasmid
請問有沒有其他方法把切過與為切或切不完全的vector分離開來
會是要怎樣處理會讓insert接入的效果更好？
--
* Origin: ★ 交通大學資訊科學系 BBS ★ <bbs.cis.nctu.edu.tw: 140.113.23.3>
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: coiled.bbs@bbs.ntu.edu.tw (嗯...酷酷的喔), 看板: Biology
標 題: Re: vector要如何處理才切得乾淨
發信站: 台大計中椰林風情站 (Thu Dec 3 11:58:42 1998)
轉信站: Ptt!news.ntu!Palmarama
有一些小建議
首先切過的 vector 可以在較低 percentage 的電泳片上跑久一點 使與未 complete cut 的
vector 分開遠一點
另外 用 CIP( Calf intestinal alkaline phosphatase ) 處理 vector 蠻有用的
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: carolhan.bbs@x3.vit.edu.tw (愛貓小毛的媽媽), 看板: Biology
標 題: Re: vector要如何處理才切得乾淨
發信站: TBG (Mon Dec 7 21:54:01 1998)
轉信站: Ptt!news.ntu!ctu-gate!news.nctu!news.ncu!vit_news.vit!TBG
※ 引述《gswill.bbs@cis.nctu.edu.tw (艸凡)》之銘言：
: 實驗中要用兩個限制酵素切vector，然後以agarose電泳回收。
: 可是加入insert去做ligation
: 卻常會篩到原來的vector plasmid
: 請問有沒有其他方法把切過與為切或切不完全的vector分離開來
: 會是要怎樣處理會讓insert接入的效果更好？
a. 你要看看RE的切割位置是否太近, 如果太近了, 就要用CIAP分兩次切比較好
B. 如果RE SITES滿遠的,那跑膠時就跑開一點.
C. 回收時不要切太大塊,一則省材料,一則省麻煩