因為手邊沒有書...但是又急於知道...
可以請求大家幫我解答一下嘛??
--
Origin:<不良牛牧場> zoo.ee.ntu.edu.tw (140.112.18.36)
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發信人: "Kanbo Lee" <u4304051@mail.scu.edu.tw>, 看板: Biology
標 題: Re: 想請問RFLP???
發信站: SooChow University 東吳大學 (Sat Jul 29 04:23:47 2000)
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如過你只想知道個大概，天下文化出的"基因聖戰"
有提到，你可以看看參考一下
據我所知 RFLP 全名Restriction Fragment Length Polymorphisms(不知道有沒有拼
錯，包涵一下)
他作法是用restriction endonuclease作用後，再做southern blot
不同的物種所出現的片段大小會不一樣
藉以比較出兩者間的不同點，或者是有無產生mutation
詳細的我不清楚，因為我沒做過，不好意思
"為愛痴狂" <iamstacey.bbs@zoo.ee.ntu.edu.tw> 撰寫於郵件
news:3ba0BK$SbF@zoo.ee.ntu.edu.tw...
> 因為手邊沒有書...但是又急於知道...
> 可以請求大家幫我解答一下嘛??
>
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> Origin:<不
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標 題: Re: 想請問RFLP???
發信站: 草食動物園 (Sat Jul 29 12:14:53 2000)
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※ 引述《u4304051@mail.scu.edu.tw (Kanbo Lee)》之銘言：
> 如過你只想知道個大概，天下文化出的"基因聖戰"
> 有提到，你可以看看參考一下
> 據我所知 RFLP 全名Restriction Fragment Length Polymorphisms(不知道有沒有拼
> 錯，包涵一下)
> 他作法是用restriction endonuclease作用後，再做southern blot
> 不同的物種所出現的片段大小會不一樣
> 藉以比較出兩者間的不同點，或者是有無產生mutation
> 詳細的我不清楚，因為我沒做過，不好意思
每種限制脢各有特定的限制位點。
由於個體之間的DNA序列並不盡相同，即使用同一種限制脢切割，
所產生的片段長度亦可能隨個體而異。生物體的這種性質稱為限制片段長度多形性
(restriction fragment length polymorphism， 簡 稱 RFLP) 。
鐮狀細胞病(sickle cell disease)係由於b珠蛋白(b globin)的基因突變所引起。
其突變的位置正好在限制脢MSTII的限制位點。
因此用此限制脢切割，所產生的片段長度在患者與正常人之間會有差異。
此差異可以用南方印漬法檢驗出來。
出自http://www.web-books.com/chinese/BIG5/MoBio.htm
合記出版的分子生物學網書
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發信人: "Kanbo Lee" <u4304051@mail.scu.edu.tw>, 看板: Biology
標 題: Re: 想請問RFLP???
發信站: SooChow University 東吳大學 (Sun Jul 30 23:56:41 2000)
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"freedom" <angelblue.bbs@cis.nctu.edu.tw> 撰寫於郵件
news:3bbMF7$T5B@bbs.cis.nctu.edu.tw...
> ==> 在 "Kanbo Lee" <u4304051@mail.scu.edu.tw> 的文章中提到:
> > 如過你只想知道個大概，天下文化出的"基因聖戰"
> > 有提到，你可以看看參考一下
> > 據我所知 RFLP 全名Restriction Fragment Length Polymorphisms(不知道有沒有
拼
> > 錯，包涵一下)
> > 他作法是用restriction endonuclease作用後，再做southern blot
> ^^^^^^^^^^^^^有必要嗎?
> 電泳後再用EtBr染就行了...做southern要拿什麼來hy ?
他用相同的probe做southern blot，所出現的片段才有規則可循呀！
用EtBr來做染色，所有的片段都染出來了，你的電泳圖只會有smear一片
>
> > 不同的物種所出現的片段大小會不一樣
> > 藉以比較出兩者間的不同點，或者是有無產生mutation
> > 詳細的我不清楚，因為我沒做過，不好意思
> > "為愛痴狂" <iamstacey.bbs@zoo.ee.ntu.edu.tw> 撰寫於郵件
> > news:3ba0BK$SbF@zoo.ee.ntu.edu.tw...
> > > 因為手邊沒有書...但是又急於知道...
> > > 可以請求大家幫我解答一下嘛??
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> * Origin: ★ 交通大學資訊科學系 BBS ★ <bbs.cis.nctu.edu.tw:
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發信人: tetrahymena.bbs@bbs.ntu.edu.tw (暫時還沒想出來), 看板: Biology
標 題: Re: 想請問RFLP???
發信站: 台大計中椰林風情站 (Mon Jul 31 19:59:48 2000)
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==> angelblue.bbs@cis.nctu.edu.tw (freedom) 提到:
> ==> 在 "Kanbo Lee" <u4304051@mail.scu.edu.tw> 的文章中提到:
> > 他用相同的probe做southern blot，所出現的片段才有規則可循呀！
> > 用EtBr來做染色，所有的片段都染出來了，你的電泳圖只會有smear一片
> 是這樣嗎? enzyme切完以後,跑電泳自然可以看出你切出的片段及大小
> 今天假設你要分別A菌及B菌,用了Eco RI ,可能A菌的DNA切出230,450,640,900
> 而B菌切出了110, 320, 500 . 這不就有分別了嗎?而且通常不是只用一個
> restriction enzyme ,是多個再去分析,應該是這樣吧?
不是!
如果所研究的DNA非常非常小, 上面的restriction site也很少,
或許你可以從推斷片段大小來判斷結果
但是請注意, RFLP通常是用在genomic DNA上, 不是一個小小的plasmid的mapping,
genome切出來的片段大大小小一大堆, 電泳之後一定是smear一大片, 無從判讀.
這不管你分別用幾個酵素去切都一樣, 因為restrction site實在太多了.
更重要的一點, 做Southern blot的是確認某個marker所在的片段
有沒有restriction fragment的polymorphism存在
是專一地檢測該marker 並非只是泛泛地區別是否某個restriction site發生變異了
這在意義上是不同的
RFLP應用在親子鑑定 法醫學 人類遺傳學上找尋致病基因
都必須清楚地比對某個特定的marker或找尋特定的基因
不能只是概略地比較一下罷了
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發信人: greeno.bbs@bbs.ntu.edu.tw (寶妹), 看板: Biology
標 題: Re: 想請問RFLP???
發信站: 台大計中椰林風情站 (Tue Aug 1 12:29:54 2000)
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> 不是!
> 如果所研究的DNA非常非常小, 上面的restriction site也很少,
> 或許你可以從推斷片段大小來判斷結果
> 但是請注意, RFLP通常是用在genomic DNA上, 不是一個小小的plasmid的mapping,
> genome切出來的片段大大小小一大堆, 電泳之後一定是smear一大片, 無從判讀.
> 這不管你分別用幾個酵素去切都一樣, 因為restrction site實在太多了.
> 更重要的一點, 做Southern blot的是確認某個marker所在的片段
> 有沒有restriction fragment的polymorphism存在
> 是專一地檢測該marker 並非只是泛泛地區別是否某個restriction site發生變異了
> 這在意義上是不同的
> RFLP應用在親子鑑定 法醫學 人類遺傳學上找尋致病基因
> 都必須清楚地比對某個特定的marker或找尋特定的基因
> 不能只是概略地比較一下罷了
哈！終於看到懂得人出來說了～不然快吐血了～
RFLP屬於分子標記的一種，再現性高且穩定，加上結果又呈codominant
所以是製作遺傳圖譜及定位基因的有利工具～