最近做實驗碰到了一些問題...
抽完DNA後
用Hind III先切了一次
接著做klenow
再用Xho I切一次
之間都有做酒精沉澱
但是到最後跑膠時
就不見DNA了
Hind III切完後有做酒精沉澱
然後跑膠
DNA都還在
到最後就沒了 請高手幫忙
我是剛進實驗室的大學生...thanx...
酒精沉澱時該注意些什麼以減少lost呢?
用95%的酒精與isopropanol
除了體積的不同外 還有哪些差別?
謝謝...
--
滾滾長江東逝水,浪花淘盡英雄,
是非成敗轉頭空,青山依舊在,幾度夕陽紅.
白髮漁樵江渚上,慣看秋月春風,
一壺濁酒喜相逢,古今多少事,都付笑談中.
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.twbbs.org)
◆ From: 203.69.179.76
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發信人: ddress.bbs@bbs.mgt.ncu.edu.tw (逃), 看板: Biology
標 題: Re: 請指點...
發信站: 中大資管龍貓資訊天地 (Sat Aug 5 16:08:55 2000)
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==> mushrooms.bbs@ptt.csie.ntu.edu.tw (月照一孤舟) 提到:
: 最近做實驗碰到了一些問題...
: 抽完DNA後
: 用Hind III先切了一次
: 接著做klenow
: 再用Xho I切一次
: 之間都有做酒精沉澱
: 但是到最後跑膠時
: 就不見DNA了
: Hind III切完後有做酒精沉澱
: 然後跑膠
: DNA都還在
: 到最後就沒了 請高手幫忙
: 我是剛進實驗室的大學生...thanx...
: 酒精沉澱時該注意些什麼以減少lost呢?
: 用95%的酒精與isopropanol
: 除了體積的不同外 還有哪些差別?
: 謝謝...
如果RE使用的buffer一樣的話，建議妳一次就用多種RE切完
另外注意你的RE是不是有被DNAse污染
可以在RE處理完後，不要沈澱，先跑一次電泳確定一下
如果還是不行 多抽點DNA來做吧 正常的lose是一定會有的
祝你幸運嚕 實驗的新鮮人 加油嚕！！
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作者: mushrooms (月照一孤舟) 看板: Biology
標題: Re: 請指點...
時間: Sat Aug 5 23:35:20 2000
※ 引述《ddress.bbs@bbs.mgt.ncu.edu.tw (逃)》之銘言：
: ==> mushrooms.bbs@ptt.csie.ntu.edu.tw (月照一孤舟) 提到:
: : 最近做實驗碰到了一些問題...
: : 抽完DNA後
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: : 再用Xho I切一次
: : 之間都有做酒精沉澱
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: : Hind III切完後有做酒精沉澱
: : 然後跑膠
: : DNA都還在
: : 到最後就沒了 請高手幫忙
: : 我是剛進實驗室的大學生...thanx...
: : 酒精沉澱時該注意些什麼以減少lost呢?
: : 用95%的酒精與isopropanol
: : 除了體積的不同外 還有哪些差別?
: : 謝謝...
: 如果RE使用的buffer一樣的話，建議妳一次就用多種RE切完
這個...沒辦法阿...
因為中間還有做klenow
所以要分開切...
一次切完的已經練習到可以美次都成功了
可是這分開切的就...
我會在努力的...
另外注意你的RE是不是有被DNAse污染
: 可以在RE處理完後，不要沈澱，先跑一次電泳確定一下
: 如果還是不行 多抽點DNA來做吧 正常的lose是一定會有的
: 祝你幸運嚕 實驗的新鮮人 加油嚕！！
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作者: mushrooms (月照一孤舟) 看板: Biology
標題: Re: 請指點...
時間: Sat Aug 5 23:35:20 2000
※ 引述《ddress.bbs@bbs.mgt.ncu.edu.tw (逃)》之銘言：
: ==> mushrooms.bbs@ptt.csie.ntu.edu.tw (月照一孤舟) 提到:
: : 最近做實驗碰到了一些問題...
: : 抽完DNA後
: : 用Hind III先切了一次
: : 接著做klenow
: : 再用Xho I切一次
: : 之間都有做酒精沉澱
: : 但是到最後跑膠時
: : 就不見DNA了
: : Hind III切完後有做酒精沉澱
: : 然後跑膠
: : DNA都還在
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: : 我是剛進實驗室的大學生...thanx...
: : 酒精沉澱時該注意些什麼以減少lost呢?
: : 用95%的酒精與isopropanol
: : 除了體積的不同外 還有哪些差別?
: : 謝謝...
: 如果RE使用的buffer一樣的話，建議妳一次就用多種RE切完
這個...沒辦法阿...
因為中間還有做klenow
所以要分開切...
一次切完的已經練習到可以美次都成功了
可是這分開切的就...
我會在努力的...
另外注意你的RE是不是有被DNAse污染
: 可以在RE處理完後，不要沈澱，先跑一次電泳確定一下
: 如果還是不行 多抽點DNA來做吧 正常的lose是一定會有的
: 祝你幸運嚕 實驗的新鮮人 加油嚕！！
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發信人: YORKIE.bbs@bbs.nchu.edu.tw (YiWen), 看板: Biology
標 題: Re: 請指點...
發信站: 興大天樞資訊網 (Wed Aug 9 10:00:02 2000)
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==> 在 [mushrooms.bbs@ptt.csie.ntu.edu.tw] 文中提到:
: 用95%的酒精與isopropanol
: 除了體積的不同外 還有哪些差別?
因為isopropanol是三個碳,且有支鏈,
所以捉DNA的效果可能會比酒精好...
不過,相對捉到雜質的機會也比較高呢...