請問各位大大...我現在在P TNF-alpha的RT-PCR,
結果百做不出,而且不斷做出genomic DNA的片段.
我嘗試加高anneal的溫度,結果還是一樣,連原本該有的band都不見了.
我follow paper上的program也得到同樣的結果,該怎麼辦勒?
還有....有人說rt-PCR可以(or 不要)加一開始的94度5 min,
可以直接進入cycles,請問這樣會差在哪?
我抽rna的kit是Quiogen的kit,beta-actin的RT-PCR也正常,不過所有的RNA都轉成
cDNA了..........
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oRigiN: 成大資工BBS站 (140.116.247.7)
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發信人: fungiHsu.bbs@bbs.ntu.edu.tw (bleu), 看板: Biology
標 題: Re: PCR求救!!!!!
發信站: 台大計中椰林風情站 (Tue Feb 5 00:00:23 2002)
轉信站: Ptt!news.ntu!Palmarama
==> vagus.bbs@bbs.csie.ncku.edu.tw (blue) 提到:
> 請問各位大大...我現在在P TNF-alpha的RT-PCR,
> 結果百做不出,而且不斷做出genomic DNA的片段.
> 我嘗試加高anneal的溫度,結果還是一樣,連原本該有的band都不見了.
> 我follow paper上的program也得到同樣的結果,該怎麼辦勒?
> 還有....有人說rt-PCR可以(or 不要)加一開始的94度5 min,
> 可以直接進入cycles,請問這樣會差在哪?
> 我抽rna的kit是Quiogen的kit,beta-actin的RT-PCR也正常,不過所有的RNA都轉成
> cDNA了..........
Just one suggestion. After RNA purification, do the DNase treatment before
processing reverse transcription. This should prevent the contamination of
genomic DNA in your RNA sample.
--
☆ [Origin:椰林風情] [From: ux5.cso.uiuc.edu] [Login: **] [Post: 25]
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發信人: gabriel.bbs@bbs.nchu.edu.tw (She've left already ...), 看板: Biology
標 題: Re: PCR求救!!!!!
發信站: 興大天樞資訊網 (Tue Feb 5 17:10:48 2002)
轉信站: Ptt!news.ntu!freebsd.ntu!ctu-peer!news.nctu!nchunews.nchu!Pivot
※ 引述《vagus.bbs@bbs.csie.ncku.edu.tw (blue)》之銘言：
> 請問各位大大...我現在在P TNF-alpha的RT-PCR,
> 結果百做不出,而且不斷做出genomic DNA的片段.
> 我嘗試加高anneal的溫度,結果還是一樣,連原本該有的band都不見了.
try to make annealing tempreture ladder from low to high ....
> 我follow paper上的program也得到同樣的結果,該怎麼辦勒?
or do nest-PCR .....
> 還有....有人說rt-PCR可以(or 不要)加一開始的94度5 min,
> 可以直接進入cycles,請問這樣會差在哪?
> 我抽rna的kit是Quiogen的kit,beta-actin的RT-PCR也正常,不過所有的RNA都轉成
> cDNA了..........
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