由於實驗需抽mRNA所以想請教有經驗的人
看如何作會有較好的結果.....thx
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發信人: "Kanbo Lee" <u4304051@mail.scu.edu.tw>, 看板: Biology
標 題: Re: 抽mRNA要注意那些?
發信站: SooChow University 東吳大學 (Tue Jul 25 00:51:49 2000)
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小心 RNase 的污染
一般是用DEPC水防止RNase作怪
不過我有一個疑問，不知道抽total RNA跟mRNA的方法有何不同？？？
又是以何種原理分離total RNA 與 mRNA？？？
我只抽過total RNA沒抽過mRNA不過我個人很懷疑，真的能夠分開嗎？
"p ^_^ q.....加油" <gst.bbs@cis.nctu.edu.tw> 撰寫於郵件
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> 由於實驗需抽mRNA所以想請教有經驗的人
> 看如何作會有較好的結果.....thx
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發信人: tsao.bbs@bbs.ntu.edu.tw (慢慢變老的Bart), 看板: Biology
標 題: Re: 抽mRNA要注意那些?
發信站: 台大計中椰林風情站 (Tue Jul 25 06:54:42 2000)
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==> u4304051@mail.scu.edu.tw (Kanbo Lee) 提到:
> 小心 RNase 的污染
> 一般是用DEPC水防止RNase作怪
> 不過我有一個疑問，不知道抽total RNA跟mRNA的方法有何不同？？？
> 又是以何種原理分離total RNA 與 mRNA？？？
> 我只抽過total RNA沒抽過mRNA不過我個人很懷疑，真的能夠分開嗎？
沒錯!
RNA操作的重點就是在防止RNase的污染.
所有的試劑必須用 0.1% DEPC處理或用DEPC處理過的水調配,
玻璃器皿與金屬在攝氏240度加熱四個小時,
塑膠器皿用0.1 M NaOH浸泡十分鐘再用清水沖淨,
微量離心管與tip用全新剛拆封的, RNase free的,
還有全程戴手套操作.
至於如何分mRNA,
古典方法是先粹取total RNA, 再通過oligo d(T) 的affinity column
oligo d(T)可以與 mRNA的poly(A) 結合
因而達到分離 poly(A)+ RNA與其他RNA的目的
一般細胞中mRNA佔總RNA的總量只有小於5% rRNA至少有85%以上
所以分離 poly(A)+ RNA 時或多或少會參雜一些 rRNA