※ 引述《robinson.bbs@bbs.ntu.edu.tw (狂戀大提琴)》之銘言：
> ==> netsky.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (靜) 提到:
> > 3.是否有人試過用 TCA/acetone 將蛋白質沈澱出來之後，再以
> > cool acetone 洗，這樣還需要透析嗎？蛋白質會不會嚴重lose？
> 我不是高手....所以前兩個問題不能回答....
> 第三個問題因為做過....所以看看能不能幫忙....
> TCA沈澱是利用TCA這個酸來沈澱出蛋白質....
> 所以當把蛋白質沈澱離下來後....要用ACETONE洗pellet...把多餘的酸洗掉...
> 最後要把蛋白質沈澱溶在比較鹼性的buffer裡....才可能完全溶解....
> 當然...你的蛋白質會不會因為酸而改變活性....這就要考慮啦....
我的情況是要考慮蛋白質會不會因此而改變等電點…
那你們呢？都不需要考慮活性嗎？
> 唯一的好處是....沈澱後的蛋白質不會有鹽濃度過高的問題....
> 沈澱時處理的體積也不會放大太多.....
> 但是太酸是要考慮的地方..
原來如此，不過沈澱出來的蛋白質要如何定量呢？
稱重嗎，不會吧？…
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非常謝謝大家熱心的回答～～
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※ Origin: 夢之大地 逼逼ㄟ四 <bbs.ccns.ncku.edu.tw>
◆ From: 140.116.25.221
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發信人: robinson.bbs@bbs.ntu.edu.tw (狂戀大提琴), 看板: Biology
標 題: Re: 想請教蛋白質沈澱的問題
發信站: 台大計中椰林風情站 (Thu Oct 5 23:20:11 2000)
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==> netsky.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (靜) 提到:
> ※ 引述《robinson.bbs@bbs.ntu.edu.tw (狂戀大提琴)》之銘言：
> > TCA沈澱是利用TCA這個酸來沈澱出蛋白質....
> > 所以當把蛋白質沈澱離下來後....要用ACETONE洗pellet...把多餘的酸洗掉...
> > 最後要把蛋白質沈澱溶在比較鹼性的buffer裡....才可能完全溶解....
> > 當然...你的蛋白質會不會因為酸而改變活性....這就要考慮啦....
> 我的情況是要考慮蛋白質會不會因此而改變等電點…
> 那你們呢？都不需要考慮活性嗎？
等電點會因為處理而變嗎...應該不會吧...
蛋白質活性...我的經驗是不會失去活性啦...
但是不是一定如此...不知...
請try~~~
> 原來如此，不過沈澱出來的蛋白質要如何定量呢？
> 稱重嗎，不會吧？…
蛋白質定量...是不會用稱重啦...如果你稱得出來...
請用Bradford assay或者其它方法...eq. Lowry...