請問一下蛋白質的濃度測定~

我們用fold測蛋白質濃度~~

請問一下蛋白質的濃度測定使用O.D時~~

為什麼用500~600~跟700時都測的出來~~

他的原理是甚麼??

還有用哪一個數據會比較好~~

麻煩各位能不吝指教~~
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※ Origin: 奇摩 大摩域 <telnet://bbs.kimo.com.tw> 
◆ From: 163.32.8.248

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發信人: [e-mail] (雪狼), 看板: Biology
標  題: Re: 請問一下蛋白質的濃度測定~
發信站: 興大天樞資訊網 (Tue Oct 10 00:13:13 2000)
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==> 在 [[e-mail]] 文中提到:
: .c
: 我們用fold測蛋白質濃度~~
: 請問一下蛋白質的濃度測定使用O.D時~~
: 為什麼用500~600~跟700時都測的出來~~
: 他的原理是甚麼??
: 還有用哪一個數據會比較好~~

: 麻煩各位能不吝指教~~
我們一般是用 600 來測的啦!!
但這時測的是散射的程度才對，
因為那是可見光的範圍不是嗎??
我想應該都一樣吧!
你的蛋白質應該是不溶於水中才這樣測的吧!
不然我測calmodulin時都是測 280 的，測其tyrosine的吸收度說。
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Ξ Origin: 中興大學天樞資訊網 <[e-mail]> [FROM: 203.64.99.110]

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發信人: [e-mail] (bee), 看板: Biology
標  題: Re: 請問一下蛋白質的濃度測定~
發信站: 台大計中椰林風情站 (Wed Oct 11 14:11:42 2000)
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==> [e-mail] (雪狼) 提到:
> ==> 在 [[e-mail]] 文中提到:
> : .c
> : 我們用fold測蛋白質濃度~~

您是說  Bradford method嗎?



> : 請問一下蛋白質的濃度測定使用O.D時~~
> : 為什麼用500~600~跟700時都測的出來~~
> : 他的原理是甚麼??

protein 會跟 dye 反應形成一個生色的物質
那這個物質會有特定的吸收峰
你如果去測它的吸收範圍
你會發現吸收峰範圍很廣
但是在 595nm 會有極大直
所以標準的 protocol 會建議你用 595nm 當測定波常
但是在其他的地方因為是在吸收峰的山腰
所以你去測也會也吸收
重點是
這種吸光反應最好選極大值當測定波常
除非有其他的干擾需要偏移波長
不然不要換到其他的位置


> : 還有用哪一個數據會比較好~~

吸收峰的極大值



> : 麻煩各位能不吝指教~~
> 我們一般是用 600 來測的啦!!
> 但這時測的是散射的程度才對，
> 因為那是可見光的範圍不是嗎??
> 我想應該都一樣吧!
> 你的蛋白質應該是不溶於水中才這樣測的吧!
> 不然我測calmodulin時都是測 280 的，測其tyrosine的吸收度說。

280定 protein 含量會有一個問題
如果該蛋白的 tyrosine 含量特別多或特別少
那280nm 得到的值就會偏大或偏小
在 protein purification 時 它可以用在 detect protein 是否被洗出 column
但是在定量上有誤差會產生
我看過一些 paper 用一個公式
直接用 280nm 的吸收值換算 protein 含量





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