請教一個有關 electrophoresis 的問題......

    各位網友 :
        小弟最近利用一般 Agarose gel electrophoresis 來分離
    high-molecular-weight DNA fragments, 但分離的效果一直不
    佳, 所以想請問各位先進, 要改變何種條件 (ex. Volt, Time, 
    Gel concentration, etc....) 才能得到較佳的分離效果.....
    謝謝.........

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 ◎ Origin: 中央松濤站□bbs.ee.ncu.edu.tw  From: gene.life.ncu.edu.tw

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發信人: [e-mail] (), 看板: Biology
標  題: Re: 請教一個有關 electrophoresis 的問題......
發信站: 台大計中椰林風情站 (Sat Nov 21 11:16:27 1998)
轉信站: Ptt!news.ntu!Palmarama

==> [e-mail] (這一次我絕不放手) 提到:
> ==> 在 [e-mail] (屋頂上的提琴뼠的文章中提到:
> >     各位網友 :
> >         小弟最近利用一般 Agarose gel electrophoresis 來分離
> >     high-molecular-weight DNA fragments, 但分離的效果一直不
> >     佳, 所以想請問各位先進, 要改變何種條件 (ex. Volt, Time,
> >     Gel concentration, etc....) 才能得到較佳的分離效果.....
> >     謝謝.........
>         可以利用 Pulsed Field Gel Electrophoresis method 來分離
>         high-molecular-weight DNA fragments.

有這種機器當然是最好呀！不過滿貴的就是了
您可以試著將agarose的濃度降低一點(0.5~0.8%)然後用較低的電壓
（大約是泳動距離cm*5）
例如：長15cm的膠用75V左右跑
用大片一點的膠，反正要大分子的部分可以等第一條dye跳海以後再停
大概就可以分的滿漂亮的（我是指大約1kb以上的）
不過要小心膠片破掉那就得玩拼圖了
是要回收做probe嗎？？

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發信人: [e-mail] (叫我老人), 看板: Biology
標  題: Re: 請教一個有關 electrophoresis 的問題......
發信站: willbbs (Sat Nov 21 16:29:21 1998)
轉信站: Ptt!news.ntu!will

※ 引述《[e-mail] ()》之銘言：
: ==> [e-mail] (這一次我絕不放手) 提到:
: >         可以利用 Pulsed Field Gel Electrophoresis method 來分離
: >         high-molecular-weight DNA fragments.
: 有這種機器當然是最好呀！不過滿貴的就是了
: 您可以試著將agarose的濃度降低一點(0.5~0.8%)然後用較低的電壓
: （大約是泳動距離cm*5）
: 例如：長15cm的膠用75V左右跑
: 用大片一點的膠，反正要大分子的部分可以等第一條dye跳海以後再停
: 大概就可以分的滿漂亮的（我是指大約1kb以上的）
: 不過要小心膠片破掉那就得玩拼圖了
: 是要回收做probe嗎？？


其實你只要用大約是0.6%的agarose gel
以50 V來跑就可以了 .......約跑各一小時............
大約20 kB的都可以分的出來

用一般的迷你電永槽就可以啦............





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發信人: [e-mail] (屋頂上的提琴貓), 看板: Biology
標  題: Re: 請教一個有關 electrophoresis 的問題......
發信站: 中央大學松濤風情資訊站 (Mon Nov 23 10:27:02 1998)
轉信站: Ptt!news.ntu!spring!news.csie.ncu!Evergreen

>==>發信人: [e-mail] (老人), 信區: Biology
>※ 引述《[e-mail] (屋頂上的提琴貓)》之銘言：
>: >有這種機器當然是最好呀！不過滿貴的就是了
>: >您可以試著將agarose的濃度降低一點(0.5~0.8%)然後用較低的電壓
>: >（大約是泳動距離cm*5）
>: >例如：長15cm的膠用75V左右跑
>: >用大片一點的膠，反正要大分子的部分可以等第一條dye跳海以後再停
>: >大概就可以分的滿漂亮的（我是指大約1kb以上的）
>: >不過要小心膠片破掉那就得玩拼圖了
>: >是要回收做probe嗎？？
>:      我是要建立 genomic library 用的..........
>那你的genomic DNA是要多大的片段呢?
>若是要1~10kb的話.....
>你就做partial digestion
>跑電泳號在回收須要的片段......
>在純化之......
>就可以接入vector啦........

     DNA fragments 大約在 30~50 Kb 之間........