as title
我是用galetin做substrate
再用commassie blue染色的方法
可是每次在gel上方都會有很強的活性干擾
這是正常的現象嗎?
如果不是,有沒有辦法克服?
我已經做了半年
至今無法突破
希望有做過或正在做的板友
或者有好意見的人
可以提供一點意見嗎
感激不盡
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ptt植物所版副版主
請大家多來灌水
曾是風......
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☆ [Origin:椰林風情] [From: YKW.bot.ntu.edu.tw] [Login: **] [Post: **]
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發信人: tttest.bbs@bbs.kimo.com.tw (變色龍), 看板: Biology
標 題: Re: 有沒有人跑過protease activity PAGE?
發信站: 奇摩大摩域 (Tue Aug 15 11:13:04 2000)
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※ 引述《sifon.bbs@bbs.ntu.edu.tw (新猛男)》之銘言：
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> 我是用galetin做substrate
> 再用commassie blue染色的方法
> 可是每次在gel上方都會有很強的活性干擾
> 這是正常的現象嗎?
> 如果不是,有沒有辦法克服?
> 我已經做了半年
> 至今無法突破
> 希望有做過或正在做的板友
> 或者有好意見的人
> 可以提供一點意見嗎
> 感激不盡
敝人是作過類似的enzyme activity gel stain
不過是偵測esterase,不是protease,故不知是否能有所幫助
基本上要在膠體上偵測酵素活性,作法有兩種
1.先將蛋白載入不含SDS的膠體中電泳,再於電泳畢後染色
2.將蛋白載入含SDS的膠體中電泳,再將膠體中的SDS去除,再作活性染色
想必你是使用第一類的方法
該方法的原理是gelatin為蛋白的一種
若電泳後若某處蛋白具protease能力,則可將該處gelatin分解
用染蛋白質的染劑(如原作者所提commassie blue)一染 無gelatin區則具有protease活性
您所謂很強的活性干擾意指無gelatin區域很大嗎?
那我會懷疑您的蛋白樣本未經膠體良好的分離,而皆群聚在膠體上端
通常我在作活性染色時會同時跑一片不含substrate及SDS的膠
再用染蛋白質的染劑染出到底蛋白質樣本在膠體中的分布情形
您了解唄 因膠體不含SDS 故蛋白樣本於膠體中的分離效果很差
所以膠體上同一位置可能含有多種蛋白存在