有人跑過 low molecular weight 的 Western Blot嗎?
我這陣子在做，約 6-7 KD （Metallothionein ），一直跑得不夠好，
ECL 出來不是很 sharp，有點散開的感覺！
也試了一些 paper上跑 low molecular weight的技巧 （著重在改良transfer），
但是作不到 paper 所 show 那麼好！
不知是 PAGE （ 18 ％ ）或是 transfer 的問題？
有無高手幫個忙吧！
謝啦！
ꄊ--
☆ [Origin:椰林風情] [From: 140.109.41.190] [Login: **] [Post: 75]
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標 題: Re: 跑 low molecular weight的western blot?
發信站: 台大計中椰林風情站 (Wed Jul 19 23:38:18 2000)
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==> satyricon (每朵玫瑰皆有刺...) 提到:
> 有人跑過 low molecular weight 的 Western Blot嗎?
> 我這陣子在做，約 6-7 KD （Metallothionein ），一直跑得不夠好，
> ECL 出來不是很 sharp，有點散開的感覺！
> 也試了一些 paper上跑 low molecular weight的技巧 （著重在改良transfer），
> 但是作不到 paper 所 show 那麼好！
> 不知是 PAGE （ 18 ％ ）或是 transfer 的問題？
你跑的應該是SDS-PAGE?
你指的散開是?? smear??? 那就是你的蛋白質degrade掉了!
有沒有加protease inhibitor?
如果你只加一種的話
建議你用portease cocktail試試看!
我覺得transfer一搬來說比較少出狀況!
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標 題: Re: 跑 low molecular weight的western blot?
發信站: 清華資訊(楓橋驛站) (Thu Jul 20 09:48:11 2000)
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※ 引述《satyricon.bbs@bbs.ntu.edu.tw (每朵玫瑰皆有刺...)》之銘言：
> 有人跑過 low molecular weight 的 Western Blot嗎?
> 我這陣子在做，約 6-7 KD （Metallothionein ），一直跑得不夠好，
> ECL 出來不是很 sharp，有點散開的感覺！
> 也試了一些 paper上跑 low molecular weight的技巧 （著重在改良transfer），
> 但是作不到 paper 所 show 那麼好！
> 不知是 PAGE （ 18 ％ ）或是 transfer 的問題？
> 有無高手幫個忙吧！
> 謝啦！
> ꄊ
不知道你ECL壓片的時間多久?
有時會因為壓片時間太長而使得band變得肥大且散開
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發信人: Philf.bbs@bbs.cs.nthu.edu.tw (無聊的想飛), 看板: Biology
標 題: Re: 跑 low molecular weight的western blot?
發信站: 清華資訊(楓橋驛站) (Thu Jul 20 20:53:09 2000)
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※ 引述《satyricon.bbs@bbs.ntu.edu.tw (每朵
玫瑰皆有刺...)》之銘言：
> 有人跑過 low molecular weight 的 Western Blot嗎?
> 我這陣子在做，約 6-7 KD （Metallothionein ），一直跑得不夠好，
> ECL 出來不是很 sharp，有點散開的感覺！
> 也試了一些 paper上跑 low molecular weight的技巧 （著重在改良transfer），
> 但是作不到 paper 所 show 那麼好！
> 不知是 PAGE （ 18 ％ ）或是 transfer 的問題？
> 有無高手幫個忙吧！
> 謝啦！
> ꄊ你的蛋白質分子量太小了
用一般SDS PAGE分離時這些小分子蛋白時容易因為
蛋白質太小容易在跑電泳時在膠體間diffuse而使band不集中
你可以試試做gradient gel，但是看你的蛋白質那麼小，幫助可能不大
（但還是值得一試）
最好的解決方法是跑專門分離小蛋白質的電泳法（如tricine SDS-PAGE）