請問一下有跑standard gel的前輩
你們的well會在comb拔起來以後, 垮得彎彎曲曲的嗎?
我的會說..放在running buffer裡面就會垮掉
不過我用的是20well的comb..相形之下就細得多了..
不知道是我藥品的問題(TEMED....date unknow.)
還是說, 本來就會這樣?
我APS用量是參考MOLECULAR CLONING裡面
加的量跟SDS一樣多...不過還是縮得蠻嚴重的..
我APS有盡量現配, 最多用一個禮拜..冰-30度保存..
我的CONDITION如上..
另外, 在COMB拔起來以後, 因為是透明的, 還是很難看到WELL..
我在想, 是不是可以在RUNNING BUFFER裡面加一點點的BROMOPHENOL BLUE?
這樣子看WELL就容易多了, 也比較不傷眼睛..:-)
會想解決這個問題的原因, 是我懷疑歪七扭八的WELL裡面PROTEIN LOADING
的寬度會不一樣....很難解釋....hmm...
就是說, 歪掉的well可能讓一條lane變得較大, 另一條變得較小..
這樣protein跑出來就會變得醜醜的..
--
※ Origin: 成大生物飛翔站 <flight.bio.ncku.edu.tw>
◆ From: flight.bio.ncku.edu.tw
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: zax.bbs@bbs.ntu.edu.tw (桎梏孤寂), 看板: Biology
標 題: Re: GEL...
發信站: 台大計中椰林風情站 (Sat Oct 21 12:27:13 2000)
轉信站: Ptt!news.ntu!bbs.ee.ntu!Palmarama
==> rosner.bbs@flight.bio.ncku.edu.tw ($@$#%@$#^%#) 提到:
> 請問一下有跑standard gel的前輩
> 你們的well會在comb拔起來以後, 垮得彎彎曲曲的嗎?
> 我的會說..放在running buffer裡面就會垮掉
> 不過我用的是20well的comb..相形之下就細得多了..
> 另外, 在COMB拔起來以後, 因為是透明的, 還是很難看到WELL..
> 我在想, 是不是可以在RUNNING BUFFER裡面加一點點的BROMOPHENOL BLUE?
> 這樣子看WELL就容易多了, 也比較不傷眼睛..:-)
> 會想解決這個問題的原因, 是我懷疑歪七扭八的WELL裡面PROTEIN LOADING
> 的寬度會不一樣....很難解釋....hmm...
> 就是說, 歪掉的well可能讓一條lane變得較大, 另一條變得較小..
> 這樣protein跑出來就會變得醜醜的..
ㄟ 根據我小小的經驗啦
well 會歪歪的是常有的事
我會用薄一點的東西伸進去buffer內把他調整直
然後再load sample
這樣就會比較好啦
不過我也不清楚會這樣和你的藥品什麼的有沒有關係
可能會有別人更清楚
我只是用外在的方法讓這個問題解決
我覺得還蠻管用的啦
看你要不要試一試
--
人生中 總有些什麼是要放棄的
很悲哀 卻也很實際
--
☆ [Origin:椰林風情] [From: ym64102.ym.edu.tw] [Login: **] [Post: **]
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: bee.bbs@bbs.csie.nctu.edu.tw (bee), 看板: Biology
標 題: Re: GEL...
發信站: 交大資工鳳凰城資訊站 (Sat Oct 21 19:57:56 2000)
轉信站: Ptt!news.ntu!news.mcu!news.cs.nthu!netnews.csie.nctu!bbs
※ 引述《rosner.bbs@flight.bio.ncku.edu.tw ($@$#%@$#^%#)》之銘言：
> 請問一下有跑standard gel的前輩
> 你們的well會在comb拔起來以後, 垮得彎彎曲曲的嗎?
> 我的會說..放在running buffer裡面就會垮掉
gel 做不好
也就是凝膠的反應不良就會這樣
通常這種問題是某一種藥的比例有問題或是藥品壞了
有幾種可能
acrylamide 有問題
有的廠牌的放久了就會這樣新鮮配也沒用
可以試看看比較大場的公司的藥
聚合反應會受溫度與 O2 的影響
有時季節改變你室溫也變的話
就會有聚合反應過久的問題
把 TEMD 加多一點讓凝固反應在加藥後15 min 內凝固
也可迴避掉你的問題
做好的膠最好在1小時以後再拔 comb
那時候 gel 的強度才會到
> 不過我用的是20well的comb..相形之下就細得多了..
> 不知道是我藥品的問題(TEMED....date unknow.)
> 還是說, 本來就會這樣?
> 我APS用量是參考MOLECULAR CLONING裡面
> 加的量跟SDS一樣多...不過還是縮得蠻嚴重的..
> 我APS有盡量現配, 最多用一個禮拜..冰-30度保存..
> 我的CONDITION如上..
> 另外, 在COMB拔起來以後, 因為是透明的, 還是很難看到WELL..
> 我在想, 是不是可以在RUNNING BUFFER裡面加一點點的BROMOPHENOL BLUE?
> 這樣子看WELL就容易多了, 也比較不傷眼睛..:-)
你把 comb 插上
在 gel 最外面用一個 投影片
裁成[跟你跑的 gel 面一樣的大小的透明片
按 comb 的形狀把它用不會掉色的油性比把 comb 畫起來
每次要 loading 就可以把這片 投影片貼在玻璃外側
按照你畫的 well 來 loading 這樣就不會跑掉了
> 會想解決這個問題的原因, 是我懷疑歪七扭八的WELL裡面PROTEIN LOADING
> 的寬度會不一樣....很難解釋....hmm...
> 就是說, 歪掉的well可能讓一條lane變得較大, 另一條變得較小..
> 這樣protein跑出來就會變得醜醜的..
--
※ Origin: 交大資工鳳凰城資訊站 <bbs.csie.nctu.edu.tw>
◆ From: ccvax.sinica.edu.tw
> -------------------------------------------------------------------------- <
發信人: yd008.bbs@bbs.nchu.edu.tw (黃狗), 看板: Biology
標 題: Re: GEL...
發信站: 興大天樞資訊網 (Mon Oct 23 15:22:46 2000)
轉信站: Ptt!news.ntu!ctu-gate!news.nctu!ccnews.nchu!news.nchu!Pivot
==> 在 [bee.bbs@bbs.csie.nctu.edu.tw] 文中提到:
: u!
: ※ 引述《rosner.bbs@flight.bio.ncku.edu.tw ($@$#%@$#^%#)》之銘言：
: > 請問一下有跑standard gel的前輩
: > 你們的well會在comb拔起來以後, 垮得彎彎曲曲的嗎?
: > 我的會說..放在running buffer裡面就會垮掉
把 comb 插深一點點
讓 gel 不要接觸空氣
: gel 做不好
: 也就是凝膠的反應不良就會這樣
: 通常這種問題是某一種藥的比例有問題或是藥品壞了
: 有幾種可能
: acrylamide 有問題
: 有的廠牌的放久了就會這樣新鮮配也沒用
: 可以試看看比較大場的公司的藥
: 聚合反應會受溫度與 O2 的影響
: 有時季節改變你室溫也變的話
: 就會有聚合反應過久的問題
: 把 TEMD 加多一點讓凝固反應在加藥後15 min 內凝固
: 也可迴避掉你的問題
: 做好的膠最好在1小時以後再拔 comb
: 那時候 gel 的強度才會到
: > 不過我用的是20well的comb..相形之下就細得多了..
: > 不知道是我藥品的問題(TEMED....date unknow.)
: > 還是說, 本來就會這樣?
: > 我APS用量是參考MOLECULAR CLONING裡面
: > 加的量跟SDS一樣多...不過還是縮得蠻嚴重的..
: > 我APS有盡量現配, 最多用一個禮拜..冰-30度保存..
: > 我的CONDITION如上..
: > 另外, 在COMB拔起來以後, 因為是透明的, 還是很難看到WELL..
: > 我在想, 是不是可以在RUNNING BUFFER裡面加一點點的BROMOPHENOL BLUE?
: > 這樣子看WELL就容易多了, 也比較不傷眼睛..:-)
: 你把 comb 插上
: 在 gel 最外面用一個 投影片
: 裁成[跟你跑的 gel 面一樣的大小的透明片
: 按 comb 的形狀把它用不會掉色的油性比把 comb 畫起來
: 每次要 loading 就可以把這片 投影片貼在玻璃外側
: 按照你畫的 well 來 loading 這樣就不會跑掉了
: > 會想解決這個問題的原因, 是我懷疑歪七扭八的WELL裡面PROTEIN LOADING
: > 的寬度會不一樣....很難解釋....hmm...
: > 就是說, 歪掉的well可能讓一條lane變得較大, 另一條變得較小..
: > 這樣protein跑出來就會變得醜醜的..
--
Ξ Origin: 中興大學天樞資訊網 <bbs@bbs.nchu.edu.tw> [FROM: extmx.itri.org.]