請問有關fish的做法，原理，使用的儀器及注意事項
謝謝..........^o^
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※ Origin: 奇摩 大摩域 <telnet://bbs.kimo.com.tw>
◆ From: 140.120.29.60
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發信人: robertwx.bbs@bbs.ntu.edu.tw (想想), 看板: Biology
標 題: Re: 請問有關螢光原位雜交(FISH)做法和原理
發信站: 台大計中椰林風情站 (Wed Aug 23 06:10:28 2000)
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> probe以螢光物質標定
> 或是DIG或biotin,等等
> 將target細胞或組織切片固定在玻片上
> 經由前處理去掉不要的蛋白質,或是一些RNA等等....看你要看的是什麼,以及
> 以paraformaldehyde（好像是福法林之類的物質)處理防染色體或組織在denature時變形
> 前處理好的片子及probe在hot formamide下denature,
> 並將probe加到片子上進行hybridization
> 當然陸續有一系列的wash,還需考慮到stringency等問題
> 以帶有anti-DIG-螢光物質,去進行detection
> 亦以螢光染記作counterstain
> 封片後至螢光顯微鏡下觀察
> 有一本fluorescence in situ hybridization書
> micrescopy handbook27
> In Situ Hybridization:a practical guide
> A.R. Leitch等人著
FISH主要是用來測定constitutive heterochromatin的位置
用alkali來denature DNA後
再用radioactive label(3H-labeled)來hybridized
或用chemical treatment使fluorescent dye能夠binding
接下wish掉沒有hibridized的部分
經染色後做autoradiography
可發現satellite DNA在centromere附近