[方法] 我想問gelatin zymography

[ameilover (思考該走的方向)]

這個方法好像是用來檢測MMP-2和MMP-9的活性

可是我最近看的paper中也可以用來測uPA的活性

剛找了很久 還是不大了解這個方法的原理

只大概知道是利用SDS PAGE分離enzyme..

請問有沒有人知道這個方法的原理? 可不可以教教我啊??

另外也想問一下densitometric analysis是個什麼樣的技術?


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作者: Roshister (宜室宜家的臭三八) 看板: Biotech
標題: Re: [方法] 我想問gelatin zymography
時間: Wed Apr 13 19:44:39 2005

※ 引述《ameilover (思考該走的方向)》之銘言：
: 這個方法好像是用來檢測MMP-2和MMP-9的活性
: 可是我最近看的paper中也可以用來測uPA的活性
: 剛找了很久 還是不大了解這個方法的原理
: 只大概知道是利用SDS PAGE分離enzyme..
: 請問有沒有人知道這個方法的原理? 可不可以教教我啊??

 MMP-2跟MMP-9會被分泌到medium中
 所以seeding固定量的細胞一段時間後收取conditional medium
 而MMP-2跟MMP-9具有分解gelatin的能力
 所以在做gel的時候就在gel中加入適量的gelatin
 以conditional medium做SDS-PAGE後 分子量不同的MMP-2跟MMP-9會分開
 再把SDS退染掉 讓MMP-2跟MMP-9恢復活性
 經過大約一晚的時間 讓gelatin被這兩酵素作用掉
 再把gel拿去染gelatin成色 那麼就會看見整塊gel都會染上色
 除了被MMP-2以及MMP-9作用掉的地方會顯示出沒染上色
 這條band的色澤深淺表示酵素活性
 而他的粗細與否表示酵素量有沒有改變
 大概是這樣 有不足各位板友請補充摟~

: 另外也想問一下densitometric analysis是個什麼樣的技術?

 抱歉這我不懂~

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推 ygw:densitometric analysis其實就是用電腦軟體來量化比렠
→ ygw:較band的色澤深淺