推 pelagic:感謝M大 讓我對抗體跟protein有進一步了解 11/15 00:12
→ jbking:推三及結構及epitope問題 11/18 09:35
因為實驗室再研究一個protein
但是因為沒有這一個protein的抗體
所以我們在這個protein的前端接了一段8個胺基酸的Flag
再將接有Flag的protein送到細胞中 形成stable clone
在抗體來之前都是使用Flag的抗體來抓此一protein
效果也都不錯
但是現在問題來了
因為請外面公司訂做此一protein的抗體最近剛到
但是在細胞中卻什麼東西都抓不到
而再組織中卻有一條蠻明顯的band 而且接近該protein的分子量
在唯一band的附近也沒有其他雜band
這使我們非常納悶
到底是抗體有問題 抓到組織中的band只是非特異性的
或是在哪些地方出了問題
麻煩解答一下 感激不盡
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作者: Mouseking (叫我老鼠王....-_-) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 抗體在細胞株跟組織的特異性
時間: Tue Nov 14 23:54:38 2006
※ 引述《pelagic (忙阿~~~~~~)》之銘言：
: 因為實驗室再研究一個protein
: 但是因為沒有這一個protein的抗體
: 所以我們在這個protein的前端接了一段8個胺基酸的Flag
: 再將接有Flag的protein送到細胞中 形成stable clone
: 在抗體來之前都是使用Flag的抗體來抓此一protein
: 效果也都不錯
: 但是現在問題來了
: 因為請外面公司訂做此一protein的抗體最近剛到
: 但是在細胞中卻什麼東西都抓不到
可能這抗體不能做ICC，原理很簡單...因為protein有立體的結構
通常廠商合成抗體只考慮到epitope是不是很unique....
但常常這片段的氨基酸序列是埋再外面碰不到的立體結構內部
驗證這點最好也用你的細胞抽蛋白質做Western....再和你anti-
flag比較看看是不是同一條band....如果是大概就沒錯
: 而再組織中卻有一條蠻明顯的band 而且接近該protein的分子量
: 在唯一band的附近也沒有其他雜band
: 這使我們非常納悶
: 到底是抗體有問題 抓到組織中的band只是非特異性的
: 或是在哪些地方出了問題
: 麻煩解答一下 感激不盡
能做Western的抗體不見得可以做ICC，反之亦然....
同樣in vivo and in vitro也不見得有相同結果....
很多抗體可以做細胞，用在活體上就染不到東西
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