作者zamki (醫學之路殺出設計本命)
看板Biotech
標題[問題] 請教 有人從老鼠的肌肉組織中抽取total DNA過嗎?
時間Fri Apr 1 14:43:45 2005
as title 有沒有人有經驗能夠教導一下呢?
因為聽說還要把肌肉組織震碎...
有沒有人能說明一下前處理的步驟呢?
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PTT 統合生命科學研究院
Biotech 生物醫學科技研究所 腫瘤與免疫治療研究室
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◆ From: 163.22.18.105
※ 編輯: zamki 來自: 163.22.18.105 (04/01 14:45)
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作者: Shamino (hAMMerhEaD.) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 請教 有人從老鼠的肌肉組織中抽取tota …
時間: Sun Apr 3 23:48:08 2005
※ 引述《zamki (醫學之路殺出設計本命)》之銘言：
: as title 有沒有人有經驗能夠教導一下呢?
: 因為聽說還要把肌肉組織震碎...
: 有沒有人能說明一下前處理的步驟呢?
我想每個Lab的詳細流程或多或少都有差異
我大概講一下我的作法
我們會將組織用眼科剪刀盡量的剪碎(在1.5ml tube內)
泡在Lysis buffer + SDS + protease K + RNase A
55 度 C o/n
隔天離心去除沒lysis完全的碎片後
取上清液用phenol/chloroform萃
操作時我們會將blue tip 前端缺口剪大後滅菌使用
避免genomic DNA 斷裂
差不多就是這些小技巧....
詳細的配方什麼的 molecular cloning 裡面有
還有我不知道你要多少量的DNA
不過這樣抽起來要做分生方面的分析熟練後應該都可以抽到足夠的量
說的很粗略...歡迎其它先進討論或指教:)
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◆ From: 61.30.136.197
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發信人:
[email protected] (你很煩人喔), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題] 請教 有人從老鼠的肌肉組織中抽取tota …
發信站: 無名小站 (Mon Apr 4 06:24:18 2005)
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※ 引述《[email protected] (hAMMerhEaD.)》之銘言：
==omitted somte==
> 我們會將組織用眼科剪刀盡量的剪碎(在1.5ml tube內)
> 泡在Lysis buffer + SDS + protease K + RNase A
> 55 度 C o/n
靜置不搖?
我家沒有抽過組織 total DNA 的經驗, 只抽過cell lines的
不過, 在55度C o/n的情況下都會讓它搖一搖耶(in incubator),
我發現搖跟沒搖差很多(因為自己曾經忘了搖...)
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夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已相簿 http://www.wretch.cc/album 有佈景主題 速度很快 可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止可218-167-8-78.dynamic.hinet.net海
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發信人:
[email protected] (fish), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題] 請教 有人從老鼠的肌肉組織中抽取tota …
發信站: 批踢踢參 (Tue Apr 5 16:00:26 2005)
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※ 引述《[email protected] (你很煩人喔)》之銘言：
: ※ 引述《[email protected] (hAMMerhEaD.)》之銘言：
: ==omitted somte==
: > 我們會將組織用眼科剪刀盡量的剪碎(在1.5ml tube內)
: > 泡在Lysis buffer + SDS + protease K + RNase A
: > 55 度 C o/n
: 靜置不搖?
: 我家沒有抽過組織 total DNA 的經驗, 只抽過cell lines的
: 不過, 在55度C o/n的情況下都會讓它搖一搖耶(in incubator),
: 我發現搖跟沒搖差很多(因為自己曾經忘了搖...)
如果是抽老鼠tissue的genomic DNA, 建議要55C overnight,
基本上產量都很多
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◆ From: 140.109.49.152
推 jbking:推不用搖～～產量一樣多 140.116.94.78 04/05
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作者: zamki (PunkyStyle=命=) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 請教 有人從老鼠的肌肉組織中抽取tota …
時間: Wed Apr 6 22:42:33 2005
那請問....若要萃total RNA呢?
※ 引述《[email protected] (fish)》之銘言：
: ※ 引述《[email protected] (你很煩人喔)》之銘言：
: : ==omitted somte==
: : 靜置不搖?
: : 我家沒有抽過組織 total DNA 的經驗, 只抽過cell lines的
: : 不過, 在55度C o/n的情況下都會讓它搖一搖耶(in incubator),
: : 我發現搖跟沒搖差很多(因為自己曾經忘了搖...)
: 如果是抽老鼠tissue的genomic DNA, 建議要55C overnight,
: 基本上產量都很多
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◆ From: 163.22.18.105
推 jbking:都是用kit再抽...滿費時間的 140.116.94.75 04/07
推 lirayjay:用液態氮磨碎之，再用trizol抽，效果很好的 61.62.74.25 04/07
推 apa9394:可是要小心trizol很毒,記得在hood做.... 140.129.72.15 04/08
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作者: Shamino (hAMMerhEaD.) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 請教 有人從老鼠的肌肉組織中抽取tota …
時間: Sat Apr 9 22:06:14 2005
※ 引述《zamki (PunkyStyle=命=)》之銘言：
: 那請問....若要萃total RNA呢?
: ※ 引述《[email protected] (fish)》之銘言：
: : 如果是抽老鼠tissue的genomic DNA, 建議要55C overnight,
: : 基本上產量都很多
我只能說作點功課吧.....
這些技術的方法原理隨變查都一堆啊
連Kit也是一堆啊....Orz.....
真不知如何下手做去問sellers....他會跟你說你前面步驟要幹麻要買什麼東西
玩過後再跟大家聊聊其中的小技巧or疑問或心得這樣比較好啦....
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◆ From: 61.30.136.197
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作者: zamki (PunkyStyle=命=) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 請教 有人從老鼠的肌肉組織中抽取tota …
時間: Mon Apr 11 10:28:17 2005
撲吃.....其實我是突然接下這個實驗滴...
一下子還是要從肌肉抽......
其實是因為搞不懂一般tissue跟muscle前處理有啥不同
聽說muscle要使用到均質機...?
感謝大大指教嚕....
※ 引述《Shamino (hAMMerhEaD.)》之銘言：
: ※ 引述《zamki (PunkyStyle=命=)》之銘言：
: : 那請問....若要萃total RNA呢?
: 我只能說作點功課吧.....
: 這些技術的方法原理隨變查都一堆啊
: 連Kit也是一堆啊....Orz.....
: 真不知如何下手做去問sellers....他會跟你說你前面步驟要幹麻要買什麼東西
: 玩過後再跟大家聊聊其中的小技巧or疑問或心得這樣比較好啦....
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◆ From: 163.22.18.105