我想要打破酵母菌主要有兩種用途:
(1) 用PCR來確認yeast內是否有plasmid的存在
(2) 用來確認細胞內是否有想要表現protein的存在
關於(1)我用的方法是將一個colony置入100uL,然後煮5mins,取1uL當作template
不知道大家有沒有用過這個方法做過呢?
這樣的方法就可以煮破細胞了嗎?還是得要再改進什麼呢?
至於(2)我則是加入等菌體積的extraction buffer還有glass beads,以vortex 1min
,on ice 1min,共四次
因為有聽到別的實驗室有用到lyticase先處理yeast兩個小時,之後再進行打破的動作
這樣加入lyticase的步驟會與沒有加入會差很多嗎?
在此先說聲謝謝了:)
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作者: wensing (煉金術：等價交換 ) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 請教一下關於打破酵母菌的方法...
時間: Tue Mar 1 18:22:53 2005
※ 引述《lsalber (...)》之銘言：
: 我想要打破酵母菌主要有兩種用途:
: (1) 用PCR來確認yeast內是否有plasmid的存在
: (2) 用來確認細胞內是否有想要表現protein的存在
: 關於(1)我用的方法是將一個colony置入100uL,然後煮5mins,取1uL當作template
: 不知道大家有沒有用過這個方法做過呢?
: 這樣的方法就可以煮破細胞了嗎?還是得要再改進什麼呢?
可以！ 使用前，離心一下，讓一些渣沈澱下來！
另外，也可以直接沾取跑pcr，量不用太多，一點點點就可以了！
: 至於(2)我則是加入等菌體積的extraction buffer還有glass beads,以vortex 1min
: ,on ice 1min,共四次
: 因為有聽到別的實驗室有用到lyticase先處理yeast兩個小時,之後再進行打破的動作
: 這樣加入lyticase的步驟會與沒有加入會差很多嗎?
: 在此先說聲謝謝了:)
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