作者icome (我不是宅男 \("▔□▔)/)
看板Biotech
標題[問題] 用293T製造lentivirus
時間Fri Aug 31 14:23:59 2007
小弟目前是用中研院RNAi core的質體,
並依照中研院網站給的protocol下去試。
唯一跟protocol不一樣的是,
我是用lipofectamine 2000來做293T的transfection,
並非使用建議的TransIT-LT1。
transfection的方法如下:
將細胞養在6cm dish,前一天seeding,隔天細胞約五分滿,做transfection
DNA total 5ug, lipofectamine 10ul,使用OPTI-MEM,約6小時後換medium
做完隔天看細胞都還平安無事
到第三天準備收virus時發現細胞已經死了好多...
請問這是正常的嗎?還是因為liposome加了太多才死掉的?
不知道板上各位先進是否有人做過這方面的技術,是否有什麼該注意的地方
雖然protocol已經寫得蠻詳盡的 但畢竟沒人可以指教做起來怕怕的>"<
先感謝各位囉!
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A: Are you kidding?
B: No, I am serious.
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A: 你是凱蒂嗎?
B: 不,我是喜瑞兒。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
推 driws:我們之前DNA跟lipofetamine 2000是1:1 細胞ok 09/02 12:17
推 slowmove:本人試過一陣子,用他們建議的LT1的確會活的較健康. 09/02 14:34