[問題] Tween 20

[blence ( )]

    一般人做western都是以PBS或TBS加Tween 20當wash buffer
    而Tween 20屬於nonionic detergent
    所以被認為可以降低在hybridization過程中抗體nonspecific binding的機會
    並且使得membrane的背景可以乾淨一點

    不過有一般人常用Flag抗體，Sigma M2 mAb或 M5 mAb
    datasheet上建議以以TBS當buffer，而不是TBST或是PBST

    不知有人曾經把M2或M5抗體以TBST或PBST當buffer嗎？

    我是NC membrane，以TBS或TBST(0.05%) 含5% milk做blocking
    之後都是以TBS或TBST(0.05%)來wash
    結果顯示無論是M2或M5抗體（1:500）
    只要是依照datasheet使用TBS做出來的結果都很正常
    可是只要是用TBST，ECL之後卻是會讓整片membrane變成全黑的

    我的問題是：不是有Tween20就應該會比較乾淨嗎？
                還是M2跟Tween20之間有什麼問題？



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   每次都是這樣
   只要是看Flag就要特別把buffer分開

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◆ From: 61.31.145.245
※ 編輯: blence          來自: 61.31.145.245        (11/25 03:47)
推 Lipaty:我的lab的system是 PVDF membrane, M2 mAb
→ Lipaty:還有TBST 這樣做是很ok的
→ Lipaty:所以是不是NC paper的問題?
推 Lipaty:全黑不就表示二抗亂黏?
推 blence:我懷疑就算是二抗問題也不該因為用TBS就ok
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 作者  HIbaby (嗨北鼻)                                      看板  Biotech     
 標題  Re: [問題] Tween 20                                                    
 時間  Thu Nov 25 07:18:32 2004                                               
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※ 引述《blence (       )》之銘言：
:     一般人做western都是以PBS或TBS加Tween 20當wash buffer
:     而Tween 20屬於nonionic detergent
:     所以被認為可以降低在hybridization過程中抗體nonspecific binding的機會
:     並且使得membrane的背景可以乾淨一點
:     不過有一般人常用Flag抗體，Sigma M2 mAb或 M5 mAb
:     datasheet上建議以以TBS當buffer，而不是TBST或是PBST
:     不知有人曾經把M2或M5抗體以TBST或PBST當buffer嗎？

 我是用這個二抗  且用TBST洗
 不過在wash的時候 力道不是很弱就是了
 背景值還挺乾淨的
 但另一個人做 會有黑掉的情況 但是他也把wash的力道增加 也解決這個問題
 不知道這是不是原因?
                          
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推 HEYHEYHEY:題外話，TW20能歐偷課雷夫嗎？
推 Ithilloth:不需要啊 他是多醣 不會長菌