推 cloudy1205:謝謝你的回答^^，對流程大致上能瞭解^^ 10/24 01:14
※ 引述《cloudy1205 (事情好多)》之銘言：
: 我本身沒有做過，實驗室也沒有這樣的技術，
: 但是，seminar選了一篇跟protein trafficking有關的paper，
: 想把方法學弄得更清楚，所以想請教點問題：
: 1.paper上的方法學提到要將cell固定在"slide"上，請問"slide"是什麼？
: 是一種membrane，還是類似96孔盤，一個well固定一個cell，還是載玻片之類的
: 2.承接上題，如果是有孔的盤子，所有藥品都是一個well一個well加嗎？
: （用想像應該是這樣...想確定正確作法）
: 3.固定cell用的1% paraformaldehyde treat 15min後，是要抽掉、倒掉，
: 還是會乾掉？
: 目前能想到大概就這幾個問題，想請教有操作經驗的人，謝謝^^
每個實驗室的作法可能都不一樣，我也不知道你看的paper裡面的細節是怎樣，
但我說一下我的好了，看能不能幫你了解。
假設用的是6-well tray...
1. 先在各個well放一片coverslip，就是蓋玻片。
2. 然後再把細胞放進well裡面讓它長，這樣細胞就會長在coverslip上。
3. 要fix cell 的時候，把培養液抽出來，用PBS洗一下細胞，
再把PBS抽掉，加入你的.... paraformaldehyde？
(我通常都是用-20C 100%MeOH，不確定paraformaldehyde是不是也是這樣做。)
這個步驟會把你的細胞固定在coverslip上。
固定完之後，把paraformaldehyde抽出來，
加入PBS在每個well裡面。
4. 再來你就可以用工具把固定有細胞的coverslip鏟起來，
看你要怎麼處理，例如stain with antibodies...
5. 處理完的上面固定有細胞的coverslip，就可以把他固定到slide上面，
然後放到scope下面觀察.....
hope this help......
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夢想和現實是有距離的。
一切都將重新開始....
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