以下意見是一些小心得 僅供參考^___^
※ 引述《Aanitacat (小喵
~)》之銘言：
1. 有很多的抗體上面會寫應用在IHC而無標明可以應用在ICC上面
廠商是不建議我拿來做ICC，但是如果我還是想做ICC可以嗎?
會不會染不出來?
如果你手邊無法取得其他針對相同抗原且已知適合ICC的抗體
關於你提到適於應用IHC的抗體(是否有說明適合石蠟或冷凍切片的樣本?)
我個人的看法是
通常ICC的抗原呈現較IHC(尤其是石蠟切片樣本)單純
建議可以一試 染不出來的機率不高
但各步驟條件仍然要下功夫去試
2. 做完ICC以後在螢光顯微鏡下面看，是有看到紅色螢光表現(我的二抗是紅色螢光)
但是居然發現negative control的細胞也出現紅色螢光.....= =
天ㄚ~~~這已經不是第一次了....不知道到底是什麼地方出問題...
是二抗的問題呢?還是我的實驗步驟中出了問題?有沒有人對ICC非常非常了解
或是誰有相關的參考資料可以讓我參考呢??感激不盡~~
我可以想到的可能性:
1. 樣本本身的自體螢光(auto-fluorescence)
這是免疫螢光染色遇到的麻煩狀況之一
可以考慮用不同波長螢光的抗體呈現signal
2. 二抗造成的non-specific effect
可能是blocking條件不夠好
我自己在IHC實驗中是利用在blocking solution成分中加入二抗來源動物的血清
有時候會有不錯效果
以上
供參考
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