推 yiw:請問是哪一家廠牌的kit呢？ 05/21 21:27
推 aggaci:geneaid 05/22 11:20
※ 引述《yiw (開始)》之銘言：
: 請教版上曾經做過CHIP的高手
: 做了好久的CHIP最後在PCR階段遇到了困難
: input有出現band但是非常微弱
: 其他IP下的DNA根本就沒有訊號
: 參考paper利用RNA Pol II當positive control
: 但是也P不到東西
: 後來覺得可能是DNA品質不好所以測了OD 260/280
: 發現只要是IP下來的DNA ratio都非常低 大概只有1.0左右
: input比較好大概1.5左右
: 我是利用phenol/chloroform/isoamyl alcohol做DNA純化
: 每次都很小心不要取到有機層
: 但是出來的ratio還是很差
: 請問是不是因為DNA品質的關係所以PCR跑不出來？
: 如果是的話有哪個步驟要小心才能使DNA ratio提高呢？
你sonication玩是否有先跑gel以確定size介於500-1000之間？
還有我現在都不用phenol/chloroform/isoamyl alcohol了
直接用gel elution kit純化DNA 效果不錯！
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