Re: [問題] luciferase assay system的internal co …

[u8524009 (VIP好人卡....)]

※ 引述《swiker (呼~)》之銘言：
: 想請問板上各位高手
: 是否有人luciferase assay 是用GFP當internal control
: 因為我lyse細胞之後去測GFP的值都跟background差不多(大概100上下)
: 這樣就幾乎等於沒有表現了..但我luciferase的值非常高
: 所以我去確定我的transfection efficiency不差
: 因為測luciferase activity一定須將細胞lyse完全才能測到較好的值
: 因此懷疑GFP是否在lyse細胞的同時也會失去它的活性
: 請有經驗的高手幫忙解惑
: 謝謝~~~


  我也是用EGFP當internal control
  GFP的值超高的,並不會因為lysis細胞的步驟而失去活性
  建議你在lysis之前先用螢光顯微鏡看一下GFP是否有表現
  另一個可能性是你的測量螢光的波長選錯了,GFP是綠光,你可能選到紅光或其它的..



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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.114.96.172
推 ldy:那請問YFP會因為lysis的步驟而失去活性嗎?
→ ldy:其實我只要western的時候antibody認得到就好
推 u8524009:理論上做western的蛋白質都是denature form的,除非你的抗
→ u8524009:體有特別註明是認native form的,不然western應該都認得到
推 ldy:我是怕照到光然後YFPdegrade掉而影響我的定量