1. 實驗技巧上的問題...在做q-PCR要怎樣才能避免污染呢
因為做出來NTC的ct值常不穩定, 可是我能想到改進方法好像都沒什麼用
問題是否是出在水的污染呢?
2. 在做standard curve時, 是否每個sample都需要做,
還是只要用一組template來做即可呢?
謝謝嚕
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作者 aggaci (五子棋啦) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 請問q-PCR....
時間 Thu Feb 3 18:13:16 2005
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※ 引述《seaquartet (......)》之銘言：
: 1. 實驗技巧上的問題...在做q-PCR要怎樣才能避免污染呢
: 因為做出來NTC的ct值常不穩定, 可是我能想到改進方法好像都沒什麼用
: 問題是否是出在水的污染呢?
戴手套
所有東西都用q-PCR專用
不過我覺得NTC有一點點背景沒關係啦
如果實驗組CT value大概是15~25的話 NTC是35以上
那我覺得 你可以忽略 沒差
: 2. 在做standard curve時, 是否每個sample都需要做,
1種基因一組standard curve即可
: 還是只要用一組template來做即可呢?
: 謝謝嚕
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作者 Bcl2 (Ode to Joy) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 請問q-PCR....
時間 Wed Feb 9 00:45:18 2005
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※ 引述《seaquartet (......)》之銘言：
: 1. 實驗技巧上的問題...在做q-PCR要怎樣才能避免污染呢
: 因為做出來NTC的ct值常不穩定, 可是我能想到改進方法好像都沒什麼用
: 問題是否是出在水的污染呢?
Not exactly.
還有你要不要說說看你做了哪些improvement
與Q-PCR的條件(SYBRGreen or probe, mastermix or hand-made)?
除了水(本實驗室有將Q-PCR用的水和其他一般PCR分開)
還有primer的品質(你可以在order的時候向廠商要求做HPLC確認)
甚至primer的序列也"可能"會有差
(有些序列就是容易和其他物種的genome交叉反應 但也不是說換位置就能換
所以如果lab裡正好也在做其他物種的study 請留意不同實驗的的時間或空間區隔)
Finally
污染源是來自其他mixture component也並非絕無可能:p
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