我的實驗是
a-insert1-b
b-insert2-c (其中abcd代表restriction sites)
c-insert3-d
a-vector-d
my final target is a plasmid containing insert1+2+3.
這幾個restriction sites切位不會互相亂黏 (就是有的4個nts，有的2個，
ligation的時候不會黏回去。)
那我可以把insert1、2和3一起丟在一起ligate再純化出li完的frag，
然後再clone到vector上嗎??有沒有人這樣玩過?
因為如果我要一個一個做subclone，會滿麻煩的…(我得保留那些切位)
有什麼tricky的地方需要注意的??
謝謝大家的答覆囉~~~
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> 我的實驗是
> a-insert1-b
> b-insert2-c (其中abcd代表restriction sites)
> c-insert3-d
> a-vector-d
> my final target is a plasmid containing insert1+2+3.
> 這幾個restriction sites切位不會互相亂黏 (就是有的4個nts，有的2個，
> ligation的時候不會黏回去。)
> 那我可以把insert1、2和3一起丟在一起ligate再純化出li完的frag，
> 然後再clone到vector上嗎??有沒有人這樣玩過?
> 因為如果我要一個一個做subclone，會滿麻煩的…(我得保留那些切位)
> 有什麼tricky的地方需要注意的??
> 謝謝大家的答覆囉~~~
inserts小的話有可能----這不容易成功，至少在我手上是不容易。
不過，你可以放在一起ligation後再用PCR的方式amplify整段含RE sites的insert，
最後PCR出來會有a-insert1-b-insert2-c-insert3-d的final insert。
這時候只要做一次subcloning就行了。
我有試過兩個inserts(~1.0kb of each fragment)的。
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