推 samson3:cloning是運氣吧...我同學做一年也做不出來... 01/09 00:11
→ samson3:最後一個學妹只做了一個月就做出來4個... 01/09 00:11
→ samson3:去拜個拜巴...祝你好運^^ 01/09 00:12
推 Karyon:ㄟ..做不出來一定是有錯發生..要檢討出來阿 01/13 17:35
→ Karyon:總不能一輩子都是靠運氣.. 01/13 17:36
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作者: meiosisLin (吽爸) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 關於質體構築的問題
時間: Sun Jan 8 20:53:02 2006
1.BglII可以試著切久一點
2.vector及insert的比例，
Vector長度 insert長度
---------- = ------------ Vector濃度通常用100ng
Vector量 insert量
PS:切完RE和SIP過後，可以做phenyl/Chloroform純化
把enzyme去除掉..再做下一個步驟
PS2:ligation的時間可以在室溫一小時
或是16℃ o/n
PS3:plasmid切完之後，可以做Gel extraction去掉被切的部分...
試試看吧～～祝實驗順利
剛剛有網友提醒才發現單位寫錯了
重PO一篇，避免出錯....
※ 引述《ssuny (黑夜中的黑貓)》之銘言：
: 小弟不才,又來跟各位版友討教啦~
: 首先要先謝謝一下某K姓版友的幫忙
: 我成功把我要的insert切下來啦 希望這次能成功
: 嗯..不囉唆了
: 這次想要問的問題如下詳述:
: 這次要做的是 gene overexpression
: 選用的vector是 pCAMBIA-1301
: 以BglII處理 並進行去磷酸化
: 在insert方面
: 兩端的切位也都是BglII 是以partial digest切下來的
: //▅▅▅▅//▅▅▅▅▅//
: BglII BglII BglII
: 小弟將vector及insert進行ligation
: 比例約是 1:8
: 但是在做了好幾次後
: 每次長出來的菌都是vector的self-ligation
: 我已經被這個問題困擾一個多月了
: 希望有經驗的版友能幫個忙
: 謝謝
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