推 key:主要是 或是你的溫度設定條件等因素 140.109.89.86 12/18
推 koykey:但primer dimer並不一定會影響PCR 140.109.89.86 12/18
→ koykey:意思就是說 不用急著換primers 多試試吧^^ 140.109.89.86 12/18
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作者 ccdd.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (................), 看板 Biotech
標題 Re: 請問一個關於PCR的問題
時間 夢之大地 (Sat Dec 18 16:02:13 2004)
轉信 ptt!Group.NCTU!grouppost
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※ 引述《stancy.bbs@ptt.cc (又變回學生樣)》之銘言：
> ※ 引述《key ()》之銘言：
> : primer dimer
> : primer(s) 自己或彼此黏
> : 當然 polymerase一樣能作用把單股的地方加長補齊
> : 過了個cycle 又denature 這個已經變長的其中一股 當然也可以跟primer互補
> : 所以又繼續反應
> : 因此 會合成一些短短的dsDNA 我們通常直接叫 primer dimer
> 所以問題是出在primer的設計囉?
應該不是
因為每次跑PCR多多少少都會在最底下看到primer的影子
這跟pimer的設計應該沒有太大的關係
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夢之大地 逼逼ㄟ四 █▁◤ █ █ █▁▁ █ █ ▉▉▉ █▁ █ █ █ █ █▁◤
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作者 Anemos (寶寶) 看板 Biotech
標題 Re: 請問一個關於PCR的問題
時間 Sun Dec 19 10:49:13 2004
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※ 引述《ccdd.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (................)》之銘言：
: ※ 引述《stancy.bbs@ptt.cc (又變回學生樣)》之銘言：
: > 所以問題是出在primer的設計囉?
: 應該不是
: 因為每次跑PCR多多少少都會在最底下看到primer的影子
: 這跟pimer的設計應該沒有太大的關係
primer dimer本來就是常常會出現 只是或多或少 而且也當然是越少越好
不過跟primers的設計真的有很大的關係
如果認為不是primers設計的問題
那建議你可以試試縮短上機前的配製時間 而且冰上操作
以前我也遇過primer dimer的問題
因為我一次做太多管 那個時候的配製又不是太熟練流利
所以用掉太多時間 後來聽老師的建議
全程冰上操作 一但開始配製master mixture就必須在十分鐘內上機跑
之後就很少看到嚴重的primer dimer了 So可以試看看改進自己的操作過程
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◆ From: 140.117.191.32
推 key:推冰上操作 手工的hot start喔~ 省錢好用 219.84.20.245 12/19
推 stancy:有可能是我技術不熟練..謝謝喔..我再試試 140.116.193.170 12/23