→ pwl:順帶問一下dNTP怎麼保存ㄚ... 140.130.98.167 01/07
推 hyellow:對啊，所有的實驗材料都跟學長一樣嗎？ 218.160.157.1 01/07
推 wensing:把酵素以外的東西，全部更新或重配，試看갠 211.74.122.108 01/08
推 pwl:嗯...所有材料都是一樣的>< 140.130.201.77 01/08
推 Lipaty:taq壞了 61.223.31.64 01/08
推 blence:這種問題是不是問你學長比較適當呢? 61.31.148.7 01/08
推 pwl:學長畢業了... 140.130.201.50 01/08
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 ANUS.bbs@bbs.badcow.com.tw ( 龍 膽 瀉 肝 湯), 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 為什麼同樣的條件下我做PCR不會成功
時間 不良牛牧場 (Sat Jan 8 11:05:31 2005)
轉信 ptt!Group.NCTU!grouppost
───────────────────────────────────────
會不會你們家PCR machine有幾個位置是有問題的?@_@
我們家的機器固定有幾格都P不出東西
也不知道原因..
program也是follow 你學長的嗎? ._.
--
╭──── Origin:<不良牛牧場> bbs.badcow.com.tw (210.200.247.200)─────╮
│ ↘ Welcome to SimFarm BBS -- From : [140.112.121.97] │
╰◣◣◢ ◢◢《不良牛免費撥接→電話:40586000→帳號:zoo→密碼:zoo》 ◣◣◢ ─╯
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 tealover (tealover) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 為什麼同樣的條件下我做PCR不會成功
時間 Sat Jan 8 13:47:41 2005
───────────────────────────────────────
i experienced the same situation
finally i changed ddH2O and then the pcr worked
maybe u could try this possibility
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.48.77
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 enisx (PhD板 歡迎您的光臨指導) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 為什麼同樣的條件下我做PCR不會成功
時間 Sat Jan 8 16:49:58 2005
───────────────────────────────────────
照片先丟上來給大家看一下吧
因為說不定您認為沒問題的地方正是有問題的地方
PCR發生問題 從ddH2O ,PCR buffer, R/F primer,Taq ,到 dNTP
每個環節都有可能出問題 (有可能濃度不對 有可能被汙染)
甚至於前面板友提到的機器本身的問題都有可能
所以 先讓大家看一下電泳後的照片 或許可以猜猜看
不然的話 全部的reagent換過一次是最快的方法
--
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.72.197
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 pwl (蓄勢待發) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 為什麼同樣的條件下我做PCR不會成功
時間 Mon Jan 10 16:39:57 2005
───────────────────────────────────────
嗯...照片在這裡...
http://www.wretch.cc/album/album.php?id=pwl&book=1
大家可不可以幫我看一下...
幸好老師今天不在^^"...真沒勇氣跟他報data
※ 引述《enisx (PhD板 歡迎您的光臨指導)》之銘言：
: 照片先丟上來給大家看一下吧
: 因為說不定您認為沒問題的地方正是有問題的地方
: PCR發生問題 從ddH2O ,PCR buffer, R/F primer,Taq ,到 dNTP
: 每個環節都有可能出問題 (有可能濃度不對 有可能被汙染)
: 甚至於前面板友提到的機器本身的問題都有可能
: 所以 先讓大家看一下電泳後的照片 或許可以猜猜看
: 不然的話 全部的reagent換過一次是最快的方法
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.167
推 oplz:如果你的 positive ctrl 有 amplified 出 134.174.178.197 01/11
→ oplz:來, 那表示你的 reagents 應該都沒問題. 134.174.178.197 01/11
→ oplz:剩下的可能就是你的 template 有問題.. 134.174.178.197 01/11
→ oplz:或是你學長的結果有問題 (希望不是..) 134.174.178.197 01/11
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 zamki (林小布) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 為什麼同樣的條件下我做PCR不會成功
時間 Tue Jan 11 03:58:06 2005
───────────────────────────────────────
能否把您所作的實驗以及sample濃度, 還有各well是啥解釋更清楚一點
挖哩咧~看的霧煞煞.....不過你的marker跑得很漂亮阿
--
********
PTT 統合生命科學研究院
Biotech 生物醫學科技研究所 腫瘤與免疫治療研究室
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.225.78
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 smolljohn (阿強) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 為什麼同樣的條件下我做PCR不會成功
時間 Tue Jan 11 20:10:36 2005
───────────────────────────────────────
※ 引述《pwl (蓄勢待發)》之銘言：
: 嗯...照片在這裡...
: http://www.wretch.cc/album/album.php?id=pwl&book=1
: 大家可不可以幫我看一下...
: 幸好老師今天不在^^"...真沒勇氣跟他報data
: ※ 引述《enisx (PhD板 歡迎您的光臨指導)》之銘言：
: : 照片先丟上來給大家看一下吧
: : 因為說不定您認為沒問題的地方正是有問題的地方
: : PCR發生問題 從ddH2O ,PCR buffer, R/F primer,Taq ,到 dNTP
: : 每個環節都有可能出問題 (有可能濃度不對 有可能被汙染)
: : 甚至於前面板友提到的機器本身的問題都有可能
: : 所以 先讓大家看一下電泳後的照片 或許可以猜猜看
: : 不然的話 全部的reagent換過一次是最快的方法
請問你的positive control是怎麼選的??
還有你的template是genomic DNA還是cDNA??
另外你要不要試一下把annealing的溫度調低一點
看看會不會smear
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.239.72
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 gilchang.bbs@bbs.wretch.cc (短期代板主-無名BioTech), 看板 Biotech
標題 Re: [問題] 為什麼同樣的條件下我做PCR不會成功
時間 無名小站 (Sat Jan 15 16:58:01 2005)
轉信 ptt!Group.NCTU!grouppost
───────────────────────────────────────
※ 引述《pwl.bbs@ptt.cc (蓄勢待發)》之銘言：
> 嗯...照片在這裡...
> http://www.wretch.cc/album/album.php?id=pwl&book=1
> 大家可不可以幫我看一下...
> 幸好老師今天不在^^"...真沒勇氣跟他報data
> ※ 引述《enisx (PhD板 歡迎您的光臨指導)》之銘言：
> : 照片先丟上來給大家看一下吧
> : 因為說不定您認為沒問題的地方正是有問題的地方
> : PCR發生問題 從ddH2O ,PCR buffer, R/F primer,Taq ,到 dNTP
> : 每個環節都有可能出問題 (有可能濃度不對 有可能被汙染)
> : 甚至於前面板友提到的機器本身的問題都有可能
> : 所以 先讓大家看一下電泳後的照片 或許可以猜猜看
> : 不然的話 全部的reagent換過一次是最快的方法
我對於你在C3 template DNA那一張圖上的數據感到有些好奇:
1. PCR reaction當中為什麼要外加61.5 TE來補體積，而不是用水?
在這種條件下Taq可以忍受嗎?
(我不曉得，因為我沒這麼做過也沒查過相關資料。)
2. dNTP的量可以再減半----我家都是2.5ml stock: 10ul in 100ul reaction
3. primers的濃度是多少? 你各加5ul的樣子似乎多了些
4. 你PCR buffer的成份是什麼? 為什麼還要再外加MgCl2?
這樣一來MgCl2的濃度會是多少?
5. 你家用的Taq是多少unit per ul? 在100ul當中只含0.2ul會不會太少了些?
6. PCR program:
a) denaturing time可以減成30sec
b) annealing time也以再減成30sec
--
夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已BLOG http://www.wretch.cc/blog 安西教練 我想寫日記 嗚嗚o志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止218-167-17-226.dynamic.hinet.net海