推 midmoom:因該不是PCR吧！ 01/12 03:20
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作者: CErline (自體螢光好強…) 看板: Biotech
標題: Re: [問題]有關雜交的問題
時間: Tue Jan 10 20:30:35 2006
※ 引述《wondly (想不懂)》之銘言：
: 因為最近要做primer和他互補的DNA雜交的實驗
: 但是因為我是新手阿
: 有點不確定程序
: 我和primer互補的DNA是雙股的
: 那我是應該在雜交前把雙股的DNA加熱到92度
: 然後直接加在含有primer的溶液中嗎？？
: 希望有經驗的人幫幫我看看對不對囉
一起加進去煮就好了吧，不過如果怕會生雜band的話，
看你的enzyme有沒有 hot start的功能，
好像會貴一點。
不過如果你的primer設計得不錯，
應該會比較沒有。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.160.48.8
因為最近要做primer和他互補的DNA雜交的實驗
但是因為我是新手阿
有點不確定程序
我和primer互補的DNA是雙股的
那我是應該在雜交前把雙股的DNA加熱到92度
然後直接加在含有primer的溶液中嗎？？
希望有經驗的人幫幫我看看對不對囉
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.127.102
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發信人: stovesparkle.bbs@bbs.badcow.com.tw (平凡人平凡生活), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題]有關雜交的問題
發信站: 不良牛牧場 (Thu Jan 5 20:38:22 2006)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!SimFarm
是哪一種的實驗呢?
PCR, 還是Northern呢?
看不太懂耶~~
※ 引述《wondly.bbs@ptt.cc (想不懂)》之銘言：
: 因為最近要做primer和他互補的DNA雜交的實驗
: 但是因為我是新手阿
: 有點不確定程序
: 我和primer互補的DNA是雙股的
: 那我是應該在雜交前把雙股的DNA加熱到92度
: 然後直接加在含有primer的溶液中嗎？？
: 希望有經驗的人幫幫我看看對不對囉
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作者: wondly (想不懂) 看板: Biotech
標題: Re: [問題]有關雜交的問題
時間: Thu Jan 5 21:30:24 2006
※ 引述《stovesparkle.bbs@bbs.badcow.com.tw (平凡人平凡生活)》之銘言：
: 是哪一種的實驗呢?
: PCR, 還是Northern呢?
: 看不太懂耶~~
呵呵 不好意思 那我重新表達一次喔
就是阿 其實我是想要把primer接在玻璃片上
然後對他互補的DNA進雜交
但我的互補的DNA是雙股的
必須先加熱打開雙鍵嘛(92度)
然後我是應該再加熱完打開雙股
溫度還沒有下降很多的時候
趕快把互補的DNA和primer混合進行雜交嗎??
因為我看書上說溫度下降後
原本打開的雙股又會再度煉合回去
所以應該再還很熱的時後就混合下去雜交嗎??
還是我的步驟是錯的呢??
麻煩解答喔
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.127.102
※ 編輯: wondly 來自: 140.123.127.102 (01/05 21:31)
※ 編輯: wondly 來自: 140.123.127.102 (01/05 21:33)
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發信人: netpal486.bbs@bbs.sa.ncyu.edu.tw (&風的記憶&), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題]有關雜交的問題
發信站: 新綠園 (Fri Jan 6 18:27:51 2006)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!ncyusa
※ 引述《wondly.bbs@ptt.cc (想不懂)》之銘言：
> ※ 引述《stovesparkle.bbs@bbs.badcow.com.tw (平凡人平凡生活)》之銘言：
> : 是哪一種的實驗呢?
> : PCR, 還是Northern呢?
> : 看不太懂耶~~
> 呵呵 不好意思 那我重新表達一次喔
> 就是阿 其實我是想要把primer接在玻璃片上
> 然後對他互補的DNA進雜交
> 但我的互補的DNA是雙股的
> 必須先加熱打開雙鍵嘛(92度)
> 然後我是應該再加熱完打開雙股
> 溫度還沒有下降很多的時候
> 趕快把互補的DNA和primer混合進行雜交嗎??
> 因為我看書上說溫度下降後
> 原本打開的雙股又會再度煉合回去
> 所以應該再還很熱的時後就混合下去雜交嗎??
> 還是我的步驟是錯的呢??
> 麻煩解答喔
====================參考看看吧!!===============================
這應該是PCR...
溫度升高至9X度是 雙股變單股 或是 打開雙股成單股...都對!!
持續約一分鐘...
在降(調)溫至5X度時，把DNA和primer混合進行...
因為primer的鍊合溫度通常是40~55度，溫度太高是無法鍊合...
但鍊合完後，溫度還要升高以利其酵素作用...(升至7X度!!)..
以上為個人之解，如有錯請糾正!!...
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