最近在做cotransfect及dual-luciferase assay
由於第一次做 又沒有認識的人有經驗
想請問有經驗的人
做cotransfect時待測質體跟internal control DNA量的比
還有加多少transfect reagent
而螢光檢測時加多少量的reagent
如果有可行的protocol也希望能提供 謝謝！！
對了
我們家以上二種kit都是用promega的(←貴死人 >"<)
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作者 HIbaby (嗨北鼻) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] cotransfect及 dual-luciferase assay
時間 Sat Nov 20 09:22:51 2004
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※ 引述《micocat (de novo)》之銘言：
: 最近在做cotransfect及dual-luciferase assay
: 由於第一次做 又沒有認識的人有經驗
: 想請問有經驗的人
: 做cotransfect時待測質體跟internal control DNA量的比
12wells 的模式下
我是用invitrogen的transfection kit 你可以爬文
表現載體和報導基因的部分 總和是 1 ug
controDNA 的話 看你用哪一種 我用pCMV 約 0.5ng 就挺好用了
cell lysis 的話 50uL
那兩瓶在反應時 原先都是 50uL+50uL
後來太貴 所以轉成 30uL+30uL
步驟的話
transfection部分 看你用哪一家的 就照那一家的指示
之後
培養以後 回收前用PBS洗一次
加入lysis buffer
15min shake
取50uL到分析盤上
就去分析啦..:)
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PTT 統合生命科學研究院
Biotech 生物醫學研究所 幹細胞研究室
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