→ hyellow:Protocol 59.112.208.98 03/12
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作者: tracy9102 (舞飛櫻) 看板: Biotech
標題: Re: [問題]請問關於基因槍的一些問題~~
時間: Sat Mar 12 19:54:07 2005
※ 引述《kaieda.bbs@bbs.badcow.com.tw (縱身入海)》之銘言：
: 請問一下阿~~
: 關於基因槍的操作 是不是應該每個實驗室的protocal都差不多阿?
: 大家轉植成功的機率大約多少呢?
: 因為我的題目就是利用基因槍來進行轉殖的
: 一般平均來說 打菸草的話 應該一槍有0.5個成功的機率
: 但是我跟學長姐加起來總共打了100槍(分開打 非一次打完)
: 但是有長出callus只有兩個 其中一個還是假的~~~
: 而另一個尚在培養基當中繼續生長........
: 因此想請問一下 這樣的成果算不算是失敗阿
: 其可能的原因只是普通的機率問題嗎?
: 跟粒子的製作(例如粒子的種類.大小等....)有沒有關係呢?
: 另外真空度我是用25跟27 是否有人用其他的參數實驗過呢?
: 我找了一些paper以及也跟中興植病系的老師要了他們的protocal
: 但是沒有找到paper是有完整討論基因槍轉殖作物的東西
: 而基因槍參數跟學長姐也試了幾組 但成果都不好
: 因此上來求助~~ 願各位大大幫忙啊~~~~~ ><
: 謝謝大家~~~~ *^__________^*
我同實驗室的同學
也是做植物基因轉殖~用基因槍
他打的次數比你還多....
結果是...很慘
研二下才換題目的方向
所以念到三年級
不是你技術不好
是基因槍真的不確定性太高
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.172.52.37
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發信人: kaieda.bbs@bbs.badcow.com.tw (縱身入海), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題]請問關於基因槍的一些問題~~
發信站: 不良牛牧場 (Sat Mar 12 20:32:48 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!SimFarm
不好意思 再請問一下~~
既然基因槍的不確定性這麼高~~ 主要原因是出在哪裡呀?
只是單純的機率問題嗎.......嗚....><
既然這樣 為何大家都還要用基因槍來做轉殖阿......????
我想用農桿菌.....學弟用農桿菌轉 植株都已經長大了說.......><
※ 引述《tracy9102.bbs@ptt.cc (舞飛櫻)》之銘言：
: ※ 引述《kaieda.bbs@bbs.badcow.com.tw (縱身入海)》之銘言：
: : 請問一下阿~~
: : 關於基因槍的操作 是不是應該每個實驗室的protocal都差不多阿?
: : 大家轉植成功的機率大約多少呢?
: : 因為我的題目就是利用基因槍來進行轉殖的
: : 一般平均來說 打菸草的話 應該一槍有0.5個成功的機率
: : 但是我跟學長姐加起來總共打了100槍(分開打 非一次打完)
: : 但是有長出callus只有兩個 其中一個還是假的~~~
: : 而另一個尚在培養基當中繼續生長........
: : 因此想請問一下 這樣的成果算不算是失敗阿
: : 其可能的原因只是普通的機率問題嗎?
: : 跟粒子的製作(例如粒子的種類.大小等....)有沒有關係呢?
: : 另外真空度我是用25跟27 是否有人用其他的參數實驗過呢?
: : 我找了一些paper以及也跟中興植病系的老師要了他們的protocal
: : 但是沒有找到paper是有完整討論基因槍轉殖作物的東西
: : 而基因槍參數跟學長姐也試了幾組 但成果都不好
: : 因此上來求助~~ 願各位大大幫忙啊~~~~~ ><
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: 我同實驗室的同學
: 也是做植物基因轉殖~用基因槍
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: 所以念到三年級
: 不是你技術不好
: 是基因槍真的不確定性太高
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作者: reegqoo (帳號老是不見＞＜) 看板: Biotech
標題: Re: [問題]請問關於基因槍的一些問題~~
時間: Sat Mar 12 23:41:26 2005
我是中興植病的耶！～
其實用農桿菌轉植菸草比較快呀 效率又好
一個月就會有callus了 而且很多
兩個月就會有許多植物的長出來
所以不必用基因槍呀
還有你打的東西是怎樣的構築呀？
※ 引述《tracy9102 (舞飛櫻)》之銘言：
: ※ 引述《kaieda.bbs@bbs.badcow.com.tw (縱身入海)》之銘言：
: : 請問一下阿~~
: : 關於基因槍的操作 是不是應該每個實驗室的protocal都差不多阿?
: : 大家轉植成功的機率大約多少呢?
: : 因為我的題目就是利用基因槍來進行轉殖的
: : 一般平均來說 打菸草的話 應該一槍有0.5個成功的機率
: : 但是我跟學長姐加起來總共打了100槍(分開打 非一次打完)
: : 但是有長出callus只有兩個 其中一個還是假的~~~
: : 而另一個尚在培養基當中繼續生長........
: : 因此想請問一下 這樣的成果算不算是失敗阿
: : 其可能的原因只是普通的機率問題嗎?
: : 跟粒子的製作(例如粒子的種類.大小等....)有沒有關係呢?
: : 另外真空度我是用25跟27 是否有人用其他的參數實驗過呢?
: : 我找了一些paper以及也跟中興植病系的老師要了他們的protocal
: : 但是沒有找到paper是有完整討論基因槍轉殖作物的東西
: : 而基因槍參數跟學長姐也試了幾組 但成果都不好
: : 因此上來求助~~ 願各位大大幫忙啊~~~~~ ><
: : 謝謝大家~~~~ *^__________^*
: 我同實驗室的同學
: 也是做植物基因轉殖~用基因槍
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: 結果是...很慘
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推 apa9394:推中興基因槍好啊~帶勁! 140.129.72.15 03/13
→ apa9394:也推中興植病分生強~ 140.129.72.15 03/13
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發信人: kaieda.bbs@bbs.badcow.com.tw (縱身入海), 看板: Biotech
標 題: Re: [問題]請問關於基因槍的一些問題~~
發信站: 不良牛牧場 (Sun Mar 13 13:44:04 2005)
轉信站: ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!SimFarm
我是要把streptavidin打到菸草的葉綠體啦~~
以下是我載體的構築 簡單的寫一下 ~
從NCBI database 得到streptavidin的基因序列，
設計具有特異性的PCR引子，NcoⅠ和MluⅠ
利用PCR的方式將streptavidin基因擴增放大出來。
放大後，先構築於pGEM- T-easy-vector，
利用NcoⅠ和MluⅠ兩種限制酵素切開，
將streptavidin的DNA從pGEM- T-easy-vector切下後，
再利用相同的限制酵素購築至pNIC-101上就完成囉~~
之後就是製作基因槍的partical了
請問是不是我的載體的構築有問題呢?
所以無法和葉綠體的基因置換以及接和阿?
葉綠體的基因轉植好像很不容易成功~~
找了好幾篇的paper 都沒有類似的資料.......><
※ 引述《reegqoo.bbs@ptt.cc (帳號老是不見＞＜)》之銘言：
: 我是中興植病的耶！～
: 其實用農桿菌轉植菸草比較快呀 效率又好
: 一個月就會有callus了 而且很多
: 兩個月就會有許多植物的長出來
: 所以不必用基因槍呀
: 還有你打的東西是怎樣的構築呀？
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: : 我同實驗室的同學
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作者: tracy9102 (舞飛櫻) 看板: Biotech
標題: Re: [問題]請問關於基因槍的一些問題~~
時間: Sun Mar 13 17:51:32 2005
※ 引述《kaieda.bbs@bbs.badcow.com.tw (縱身入海)》之銘言：
: 我是要把streptavidin打到菸草的葉綠體啦~~
: 以下是我載體的構築 簡單的寫一下 ~
: 從NCBI database 得到streptavidin的基因序列，
: 設計具有特異性的PCR引子，NcoⅠ和MluⅠ
: 利用PCR的方式將streptavidin基因擴增放大出來。
: 放大後，先構築於pGEM- T-easy-vector，
: 利用NcoⅠ和MluⅠ兩種限制酵素切開，
: 將streptavidin的DNA從pGEM- T-easy-vector切下後，
: 再利用相同的限制酵素購築至pNIC-101上就完成囉~~
: 之後就是製作基因槍的partical了
: 請問是不是我的載體的構築有問題呢?
: 所以無法和葉綠體的基因置換以及接和阿?
: 葉綠體的基因轉植好像很不容易成功~~
: 找了好幾篇的paper 都沒有類似的資料.......><
為何要你做基因槍?
不是農桿菌比較好做嗎?
說各例子給你聽
我門實驗室也是這樣
做類似的實驗~但一個用農桿菌一個用基因槍
因為~你們老闆要對照啊!
如果用二種方法做類似的實驗
就可以比較出之間的差異
之後要發paper 也比較好下手來寫
所以~我們都只是老板理想下的犧牲品而已
還好...我已經畢業了 = =+
請保重
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◆ From: 218.172.49.144
推 HEYHEYHEY:Chloroplast transformation可用農桿菌嗎？132.229.111.152 03/13
推 chwchip:回上面的,基本上是用基因槍 140.120.233.26 03/15