[問題] 想請問有關electroporation的問題

[absentee (認真打拼最實際!!￾N Ｉ]

情況是這樣的

我想把帶有我insert的pUC19電進創傷弧菌中

方法如下：

1.取single colony培養3小時至OD600約0.6

2.以低離子濃度的EP buffer洗2次完後以EP buffer回溶200uL

  然後取100uL加入plasmid（320ng)，剩下100uL做control

3.將sample置入cuvatte(0.1cm)中進行electroporation（2.5kV）

4.馬上加入LB

5.再吸入1.5cc的離心管中，在37度incubator培養1小時後塗plate

結果一直無法成功，希望有人能幫幫忙

快要到我meeting了

謝謝...........Orz


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.116.94.57
推 CHHO:在第一步驟溫度低些更好
→ CHHO:在第一步驟後菌液要冰浴30分鐘以上(2-3hr更好)
→ CHHO:第二步驟後要冰浴一下子唷~~希望對原po有幫助^^
推 absentee:謝謝你...我先試試看
推 absentee:感謝感謝~我成功了︿︿
推 CHHO:歐耶~~恭喜你阿~~^^
推 hyellow:你之前電失敗跟現在電成功的時間(ms)各是多少？