推 apa9394:抽出來的時候還在嗎?確定了才能說是其他試劑或方 61.231.58.98 06/25
→ apa9394:有問題...弄一些還沒切的看看...reporter gene 61.231.58.98 06/25
→ apa9394:有時也會唬人...check it out~~ 61.231.58.98 06/25
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作者: kkndchu (陰晴不定) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] Argo抽出來的plasmid切一刀就不見??
時間: Sat Jun 25 13:13:50 2005
※ 引述《kkndchu (陰晴不定)》之銘言：
: 因為要做Agroinfiltration
: 所以要把構築好的質體轉到transform到Argo裡面
: 大小大概10kb
: 可是我轉進去抽出來之後
: 用NZ切一刀
: 可是只要一切完就不見!!!!(是空空的~~一點東西都沒有)
: 也重複了3次
: E.coli的就不會這樣
: 我去查了相關資料...只發現Argo會有比較多的多醣體
: 這...有關係嗎
: 有經驗的前輩們救一下吧~><
忘了說...有跑抽出來的
都ok..只是一切下去就人間蒸發!!
我也知道Agro的copy number低
所以抽完後三管酒精沉澱成一管
But...><
也是都沒有><
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.64.168.219
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作者: cocoli (love) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] Argo抽出來的plasmid切一刀就不見??
時間: Mon Jun 27 17:39:59 2005
※ 引述《kkndchu (陰晴不定)》之銘言：
: ※ 引述《kkndchu (陰晴不定)》之銘言：
: : 因為要做Agroinfiltration
: : 所以要把構築好的質體轉到transform到Argo裡面
: : 大小大概10kb
: : 可是我轉進去抽出來之後
: : 用NZ切一刀
: : 可是只要一切完就不見!!!!(是空空的~~一點東西都沒有)
: : 也重複了3次
: : E.coli的就不會這樣
: : 我去查了相關資料...只發現Argo會有比較多的多醣體
: : 這...有關係嗎
: : 有經驗的前輩們救一下吧~><
: 忘了說...有跑抽出來的
: 都ok..只是一切下去就人間蒸發!!
: 我也知道Agro的copy number低
: 所以抽完後三管酒精沉澱成一管
: But...><
: 也是都沒有><
我問了實驗室的學長
他們認為從agro抽出來的plasmid不應直接用來切
因為從Agro抽出來的plasmid有兩個,一個是agro本身的Ti plasmid
另一個是你送進去的plasmid,所以你在抽出來的同時會有兩種plasmid
可能需要把你抽出來的plasmid再電回E.coli中
再抽再切..因為Ti plasmid在E.coli中不會複製
所以這樣比較準...你只需要保留E.coli抽出來切也沒問題的相對的那隻agro
你看到的plasmid不一定是你的基因,所以可能被切成很多碎片之類的
原因不明
希望對你有幫助
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