推 blence:dNTP應該也是自己配的囉？ 濃度如何呢 05/24 00:29
推 littlebu:dNTP是買的 10mM 05/24 08:49
推 mandible:個人覺得應該是RT的過程有錯! 05/31 23:36
※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言：
: ※ 引述《littlebu (LittleBU)》之銘言：
: 沒有(不過得先加oligo-dT進行annealing)
我的步驟是Oligo-dT 1ul + dNTP 1ul +
RNA + Nuclease-free 11ul -> 65'C, 5min
回冰上之後再加上
Inhibitor, SSIII, DTT各1ul + Buffer 4ul
: 盡量不要，濃度不夠
: 若為定量實驗，那就用1 micro-gram做，不會怎麼樣
: 建議不要，若要濃縮何不當初以DEPC water溶RNA時體積減少?
: RNA不比DNA，他是非常脆弱的
我用的是Promega的Isolation Kit
他最後是用Nuclease-free water 100ul去把column membrane的RNA溶下來
所以不像Trizol的方式可以自己調整體積
我會試試看體積減量的狀況下能不能把RNA溶下來
再次謝謝您～
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