我實在是失敗很多次了所以上來求救一下
我是用傳統方式抽大量的plasmid..簡單敘述一下
就是加S1..S2..S3...然後離心過濾用isopropanol沉澱...TE溶解pellet
再利用LiCl將大片段的RNA去除..再沉澱再融..然後再加RNAase A在37度西30分鐘
利用PCI洗兩次最後酒精沉澱...溶在Tris Cl PH8.0...
問題就是我最後測OD的值大多在1.85左右...
可是跑膠出來的band跟測OD出來的濃度差很多...
簡單的說如果我是load 0.2ug下去...出來的band卻是細細的一條
我做了很多次也都照著步驟作...有時候還OK...可是大部分都會這樣子
真的不曉得測OD出來的那一大堆是什麼...
還請有再作maxi的人給點意見...
我真的快被搞瘋了
謝謝
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作者: kcor (人生) 看板: Biotech
標題: Re: [問題] 關於抽大量的plasmid
時間: Fri Dec 2 10:52:04 2005
※ 引述《lactis (一個陌生人)》之銘言：
: 我實在是失敗很多次了所以上來求救一下
: 我是用傳統方式抽大量的plasmid..簡單敘述一下
: 就是加S1..S2..S3...然後離心過濾用isopropanol沉澱...TE溶解pellet
: 再利用LiCl將大片段的RNA去除..再沉澱再融..然後再加RNAase A在37度西30分鐘
30分鐘要把剩下的RNA都吃光好像有點勉強
: 利用PCI洗兩次最後酒精沉澱...溶在Tris Cl PH8.0...
: 問題就是我最後測OD的值大多在1.85左右...
我覺得這個OD值有點高
我用傳統方式抽出來的OD都介於1.7-1.8之間
: 可是跑膠出來的band跟測OD出來的濃度差很多...
: 簡單的說如果我是load 0.2ug下去...出來的band卻是細細的一條
Band的下方呢？是否有任何的RNA殘留 記得膠不要跑太久才看的到
: 我做了很多次也都照著步驟作...有時候還OK...可是大部分都會這樣子
: 真的不曉得測OD出來的那一大堆是什麼...
我覺得應該是RNA沒有完全去除所造成的
: 還請有再作maxi的人給點意見...
: 我真的快被搞瘋了
: 謝謝
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