推 leoblack:感謝~ 05/24 15:20
※ 引述《leoblack (朋友看太重的猫)》之銘言：
: 如題
: 用vectorNTI搜尋到M.EcoBI這個可以用的cutting site
: 目前也只有這個cutting site可以用
: 但我遇到了2個問題
: 1.雖然vectorNTI中說M這個意思是指methylation
是的，它是指Methylation的意思
: 這意思是指M.EcoBI這酵素只切有methylation的片段嘛?
不是，M.EcoBI它並不為一個具有cutting function的酵素
相對地它是一種Methyltransferase，可以把甲基由A物質轉移到B物質上頭
而這兒的B物質是dsDNA或你用的Plasmid
A在in vivo中的話，可以是S-adenosylmethionine (AdoMet)等
: vectorNTI中標記著這酵素是methylation at 3 (6mA)--->其實我看不懂~<囧>
應該是指M.EcoBI會專一性的recognize到5'-TGAN8TGCT-3'
並於第三個位置上做甲基化 產生6-methylaminopurine (m6A)
如此可以保護這個site不被EcoBI或其他可認到相似site的酵素所切
Ref.
http://www.uniprot.org/uniprot/P06990
http://www.people.vcu.edu/~elhaij/lab/articles/NAR2001.PDF
: 2.我似乎在NEB等網站裡~找不到這個酵素
: 請問我可以去哪裡訂購這隻酵素呢?
: 感謝
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