推 Anemos:這樣通通都通了 懂了懂了 謝謝 ^_^ 203.68.96.125 10/17
→ Anemos:推文推錯篇 sorry ^ 203.68.96.125 10/17
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 SECIA () 看板 Biotech
標題 Re: [問題] RNA濃度/ Northern
時間 Wed Oct 20 23:14:53 2004
───────────────────────────────────────
※ 引述《HIbaby (嗨北鼻)》之銘言：
: 請問一下
: 我是用 trizol抽RNA
: 按步驟作
: 做完以後 測吸光 多半是1.65以上..
: 這樣的結果 到最後RNA 跑northern 都會有量不均的問題
: ok 我會再做一次酒精沈澱
: 於是吸光壓低到1.6以下
: 這樣測出來的濃度值 才是比較精確的 量也平均許多
: 但缺點是耗時 且RNA量會損失
: 請問板上大大 不知道有沒有較好的方式 來改善這個問題.:)
: 又 EtBr量 各位都添加多少.
不好意思 可以請問你吸光值和濃度之間會差異很大嗎
我們實驗室都會跑膠看ribosomal RNA作為半定量
因為吸光值只能做為參考喔
做完Northern 後還會再hy actin確定不是因為Northen的處理過程造成RNA degrade
此外我自己是覺得1.6似乎品質沒有很好耶
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.139.59
推 aggaci:quality 應該該看260/280 ratio吧?! 140.114.100.165 10/21
推 aggaci:對了 用trizol抽 ratio可達1.8 140.114.100.165 10/21
推 Anemos:也要看用來測吸光值的機器好不好 140.117.191.32 10/21
→ Anemos:我就用過很準和很不準的 -_-||| 140.117.191.32 10/21
推 SECIA:單看吸光值是不准的由是原作者是做northen 220.137.137.115 10/29
> --------------------------------------------------------------------------- <
作者 HIbaby (嗨北鼻) 看板 Biotech
標題 Re: [問題] RNA濃度/ Northern
時間 Thu Oct 21 00:39:54 2004
───────────────────────────────────────
※ 引述《SECIA ()》之銘言：
: 不好意思 可以請問你吸光值和濃度之間會差異很大嗎
: 我們實驗室都會跑膠看ribosomal RNA作為半定量
: 因為吸光值只能做為參考喔
: 做完Northern 後還會再hy actin確定不是因為Northen的處理過程造成
: RNA degrade
: 此外我自己是覺得1.6似乎品質沒有很好耶
我的程序是 測濃度 跑交 看亮度...
但是測濃度的時候 如果看比值過高的畫 濃度其實是不準的
這也是我的問題所在
所以我會再一次酒精沈澱
在去測西光 這時候比值會下降到1.6以下 濃度就可信了
所謂濃度可信 是說照濃度去loading 會讓我每一個lane的 18s都一樣均勻
但是因為多一次酒精沈澱 就有損失
不知道您的程序為何 ... 感謝~
比方說半定量後 跑膠 會有不均勻的情況嗎?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 219.1.156.27