[問題] RNAi knock down

[ad1980 (Apoptosis)]

不好意思，又是我，本來要跟上面那篇一起的，
可是問題好像不太一樣，所以開新的一篇。

還有一個問題想請教大家，
現在在做 knock-down, 用 pSuper，
想請問一下，要多久才能看到knock down 阿？
24 hrs 會太短嘛？我看papers 都是3-5 days,
但是我想問說通常transfection後，大概多久之後會開始knock-down。

還有，我現在做是用immunostaining，然後再用ImageJ量signal intensity，
看看有沒有減少，不過這樣感覺好像少了什麼。

除了Western blot之外還有其它方法知道到底有沒有成功knock-down 嘛？
因為我做RNAi主要是想確定我的Ab 是對的，是specific to my protein，
如果intensity 有減少代表Ab沒錯，問題是Ab要很concentrate才能在WB顯現，
做WB的話會用掉很多很多Ab....

不知道大家通常是怎麼確定有沒有knock down 成功。


感謝。





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　　一切都將重新開始....


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 64.180.57.97
推 mandible:用RT-PCR先抓時間點.你說有其他方法看RNAi我不太懂你的意
→ mandible:思..通常paper要protein knock down達70%才說有效果
→ ad1980:我不是說有其他方法啦！只是想看看有沒有其他方法。
→ ad1980:我的pSuper construct 是人家給的，他們已經先用RT-PCR
→ ad1980:測過了，我們拿來想試在細胞裡，看有沒有抑制蛋白質表現。
→ ad1980:要70%喔... 恩，看來我還要繼續努力試...