想請問有經驗的高手
為什麼real-time PCR的循環時間可以那麼短，以秒為單位?
我是用Roche LightCycler系統，知道它是氣冷氣熱可以快速升降溫
但是denature只要0-10秒(看過有paper用0秒，protocol建議10秒)
annealing 5秒
elongation則看amplify的片段大小，最多也不超過一分鐘
如果我為了保險起見把作用時間設得比較久
eg:denature由5-->10秒，elongation則由12秒-->15秒(我的片段大小是300 bp)
除了會浪費時間外，會不會對實驗結果不利?
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莎拉啦啦 莎拉啦啦啦 莎拉啦啦啦啦 莎拉啦啦啦啦 莎拉啦啦啦啦
莎拉公主 耶~耶~耶~ 莎拉公主 耶~耶~耶~
心地光明 玉潔冰清 莎拉阿公主
莎拉公主 耶~耶~耶~ 莎拉公主 耶~耶~耶~
樂善好施 愛人以德 莎拉公主
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夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子
之器不得已相簿 http://www.wretch.cc/album 有佈景主題 速度很快 可得志於天下
矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以
喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫
之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止 218-162-95-14.dynamic.hinet.net海
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作者 KaurJmeb ( ＫＪ) 看板 Biotech
標題 Re: [請教]有關real-time PCR
時間 Sat Dec 18 23:55:44 2004
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※ 引述《teatea9.bbs@bbs.wretch.cc (關你屁事!不要煩我!)》之銘言：
: 想請問有經驗的高手
: 為什麼real-time PCR的循環時間可以那麼短，以秒為單位?
: 我是用Roche LightCycler系統，知道它是氣冷氣熱可以快速升降溫
: 但是denature只要0-10秒(看過有paper用0秒，protocol建議10秒)
: annealing 5秒
: elongation則看amplify的片段大小，最多也不超過一分鐘
: 如果我為了保險起見把作用時間設得比較久
: eg:denature由5-->10秒，elongation則由12秒-->15秒(我的片段大小是300 bp)
: 除了會浪費時間外，會不會對實驗結果不利?
這跟PCR的產物有關呀
因為我們希望再進行real-time PCR的時候
PCR的效率能夠達到最好
所以一般而言PCR的產物不會太長
自然這些反應時間就不用太長
而且你是用Roche的lighcycler
升降溫快（每秒可以升降20 度）
用玻璃毛細管
代表溫度傳導快
所以他的建議時間是這樣
至於你說的時間加長
應該影響不大（就是浪費時間）
而elongation的時間一般而言就是25 bp/sec
依產物大小決定
300 bp那大概十二秒左右就夠了
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PS:這是ＫＪ的一位朋友所回答，他叫凱少爺，
因為他沒有id，所以只能由ＫＪ代po。
凱少爺研究所時期用Roche的real-time PCR完成他碩士論文其中一部分
現在在某家外商駐台公司當Specail List，
主要負責的產品應用也是Real time PCR。
如果大家有問題，我會請他上來和大家切磋討論。
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